人CCL21基因克隆及其序列分析.pdfVIP

国睚|雷■盈同 2011年10月第9卷 第29期 · 论 著 ·201 人CCL21基因克隆及其序列分析 刘长珐 崔 凯 李 胜 (1I临沂大学商学院，山东 临沂276000；2山东省肿瘤防治研究院，山东济南250117) 【摘要】目的 克隆人次级淋巴组织趋化因子CCL21基因。方法 设计合成克隆人CCL21基因的引物，从人淋巴结组织中提取总RNA， 利用RT-PCR技术扩增得到人CCL21基因，克隆到pEASY-T1simple载体中，PCR、酶切鉴定及DNA序列分析。结果 成功克隆出人 CCL21基因。结论 序列分析显示克隆出的 目的基因与GenBank中序列完全一致 。 【关键词】次级淋 巴组织趋化因子 ；基 因；序列分析 中图分类号：R596 文献标识码：B 文章编号：1671-8194(2011)29-0201—03 CloningandSequenceAnalysisofHumanCCL21 LIUChang-yingi．CUIKai2LiSheng2 , flSchoolofBusiness,LinyiUnivesity,Linyi276000,China,2ShandongCancerHospital,Jinan250117,China) IAbstract】ObjectiveToclonehumansecondarylymphoidtissuechemokine(heeL21)．MethodTwopairsofprimersweresynthesizedaccordingtothe hCCL21genereportedonGenBank．ThetotalRNAwasextractedfromhumanHumanlymphnodetissue，andhtenthehCCL21genewasamplifiedbyRT- PCRtechnologyandclonedimopEASY-TIsimplevector．PCR，restrictionanalysisandsequencenaalysisshowedthatthegeneclonedwasthesameasthe reportedhCCL21．ResultsThehumanCCL21genewasclonedsuccessfully．ConclusionSequenceanalysisshowedthattheclonedtargetgenesequenceis ufllyconsistentwiththehCCL21genereportedonGenBank． IKeywords】Secondarylymphoidtissuechemokine；Gene；Sequenceanalysis 次级淋巴组织趋化因子 (secondarylymphoidtissuechemokine， 精密天平；AB19700PCR仪；WH一1微型漩涡混合仪；移液器2,／tl、 SLC)属于CC亚族趋化因子，~JICCL21，是I~tNagria[IJ在人基因表达 10 l、20 l、100I．t1、200 l、1000 l；2·0~C低温冰箱；DYY-JJI[型 序列标签 (expressedsequencetag，EST)数据库中克隆出的趋化因 电泳装置等。 子，CCL21的基因定位于9p13，其eDNA序列包括847个碱基，由4个 l_3主要试剂 外显子和3个内含子组成，其分子量约为14KD，由134个氨基酸残基 Trizol试剂购 lnvitrogen公司；逆转录酶、TaqDNA聚合酶、Xba 组成，其@23个氨基酸残基为信号肽序列，111个氨基酸的成熟肽含 I