用于活体成像的人三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞系的构建.pdfVIP

· 1812 · 南方医科大学学报(JSouthMedUniv) 2011；31(11) · 基础研究 · 用于活体成像的人三阴性乳腺癌MDA．MB．231细胞系的构建 王 珂 ，谢四梅 ，何建军 ，任 予 ，夏海滨 ，张新伟 西安交通大学第一附属医院肿瘤外科，陕西 西安 710061；陕西师范大学基因治疗实验室，陕西 西安710062 摘要：目的 构建能稳定表达荧光素酶和绿色荧光蛋白的人三阴性乳腺癌MDA．MB．231细胞系以建立可用于活体成像的 三阴性乳腺癌裸鼠移植瘤模型。方法 采用磷酸钙共沉淀的方法构建表达荧光素酶和绿色荧光蛋白的慢病毒载体，体外 感染MDA．MB．231细胞 ，经G418筛选得到稳定细胞系后，通过活体成像评价感染后细胞表达荧光素酶的情况，并通过 MTT法 、transwell肿瘤侵袭模型、细胞划痕实验等评价细胞的增殖、侵袭及转移能力是否改变；此外将细胞接种至雌性 BALB／e．nu／n／u裸小鼠的右侧第2对乳房垫内，构建乳腺癌原位肿瘤模型。利用活体成像系统监测体内肿瘤的生长及转 移情况，并通过冰冻切片、HE染色评价细胞系在活体内的稳定性及成瘤能力。结果 成功构建能稳定表达荧光素酶和绿 色荧光蛋白的MDA．MB．231细胞系，荧光素酶的活性达到每细胞9689photons／s，慢病毒的整合没有改变细胞的增殖、迁 移及侵袭能力；成功建立了乳腺癌裸鼠原位移植瘤模型。结论 (1)慢病毒以其高效稳定的感染率，应作为标记荧光素酶基 因的首选载体；(2)带有荧光素酶的MDA．MB一231细胞在动物体内可被快速而灵敏的检测到，这将为人三阴性乳腺癌转 移机制的研究及抗肿瘤药物的研发提供一个直观、方便及灵敏的平台；(3)荧光素酶和荧光蛋白基因双标记优于单标记。 关键词：活体生物发光成像；MDA．MB．231细胞；三阴性乳腺癌；裸鼠；移植瘤模型 中图分类号：R737．9 文献标志码：A 文章编号：1673．4254(2011)11-1812-07 EstablishmentofabioluminescentMDA--MB-·231celllineforinvivoimagingofhuman triple—negativebreastcancerxenograft WANGKe，XIESi—mei，HElian-jun，RENYu，XIAHai—bin2,ZHANGXin—wei DepartmentofSurgicalOncology,theFirstHospitalofXianJiaotongUniversity,Xi、an710061，China；。LaboratoryofGeneTherapy, ShaanxiNormalUniversi ，Xian710062 China Abstract：ObjectiveToestablishabioluminescentMDA．．MB．．231celllinewhich canstabIvexpressluciferaseand green fluorescentprotein toallow bioluminescentimaging in nudemousemodelsbearinghuman triple—negative breastcancerxenografts．M ethods111elentiviruscarryingluc2,eGFPandneofusiongeneswerepackagedin293T cellsviacalcium phosphateco．precipitation．Humantriple—negativebreastcancercelllineMDA—M B一231wasinfected bythelentivirus，na dthepositivecellclonesweretestedforeGFPandluc2expressionsbyfluorescencemicroscopy andXenogenIVIS200bioluminescentimagingsystem，res