用免疫蛋白质组学技术筛选烟曲霉分泌蛋白中的免疫优势抗原.pdfVIP

· 538 · 临床检验杂志2011年 10月第29卷第 7期 ChinJClinLabSci，Oct．2011，Vo1．29，No．7 文章编号：1001—764X(2011)07—538-04 ·基础实验诊断研究 · 用免疫蛋白质组学技术筛选烟曲霉分泌蛋白中的免疫 优势抗原 史利宁，李芳秋，孔小祥，王仕钦，黄梅，邵海枫(南京军区南京总医院解放军临床检验医学研究所，南京210002) 摘要：目的 用免疫蛋白质组学技术筛选烟曲霉分泌蛋白中的免疫优势抗原，用于侵袭性曲霉病 (IA)的诊断标志物及疗效监 测。方法 YEPG培养基培养 14d的真菌分泌蛋白质进行二维电泳(2-DE)分离，用抗曲霉抗体fEl性的IA确诊患者混合血清 进行免疫印迹，再用质谱分析及生物信息学方法鉴定阳性反应点。结果 2-DE、免疫印迹结果显示，确诊 IA患者血清与分泌 蛋白质中多种抗原反应强烈。40个蛋白质点被抗体阳性 IA患者血清识别。对40个蛋白质点质谱分析，成功鉴定 了39个免 疫反应阳性的蛋白质点，代表 17种蛋白质，包括分泌型二肽基肽酶 V(DppV)、NAD一依赖型苹果酸脱氢酶、硫氧还蛋 白还原 酶 、醛脱氢酶、果糖二磷酸醛缩酶、3一羟丁酰辅酶A脱氢酶等。在鉴定出的17种蛋白质中，有2个为已知抗原，15个首次报道 为免疫原性蛋白质。有7种免疫原性蛋白质显示有多个蛋白质点。且在新发现的免疫原性蛋白质中，2号蛋 白质 (共 13个蛋 白质点)免疫反应最强，鉴定结果为硫氧还蛋白还原酶。结论 免疫蛋白质组学技术是筛选病原体免疫优势抗原的一种有效 方法，此次鉴定的抗原可能是潜在的疾病标志物，但还需进一步地实验加 以评估。 关键词 ：免疫蛋白质组学；烟曲霉；侵袭性曲霉病；免疫优势抗原；分泌蛋白；2一DE 中图分类号：Q936 文献标志码 ：A ImmunodominantantigenscreeningofsecretoryproteinsfromAspergillusfumigatusbyimmunoproteomics SillLi—ning，，』， 一qiu，KONGXiao—xiang，WANGShi—qin，HUANGMei，SHAOHai-Jbng(InstituteofMedicalLaboratorySciences ofPLA，Nn tngGeneralHospitalofNanjingMilitaryCommand，Na崞ng210002，Jiangsu，China Abstract：Objective ToscreentheinununodominantantigensofsecretoryproteinsrfomAspergiUus migat~byimmunoproteomicin ordertoserveasthemarkerofclinicaldiagnosisandeffectivenessoftherapyforinvasiveaspergillosis．Methods Theproteinssecreted byAspergillus migatuswhichgrewinYEPGmediafor14dayswereseparatedbytwo—dimensionalPAGE(2-DE)，andthentrans— ferredtoPVDFmembranes．Immunoblotwasperformedbyusingthemixedserafrom definitelydiagnosticpatientswithinvasiveasper— gillosis．Theimmunoreactivespotswereidentifiedbymassspectrometricanalysisandbioinofrmaticsmethod．Results 2一DE immuno～ blotingshowedthattheserafrom invasiveaspergillosispatientsreactedstronglywithaseriesofantigensinthesecretory proteins．Forty dotswererecognizedbyseraofpatientsandwereanalyzedbymassspectrometry ．Amongthem ，39 immunoreactivespotswereSUCCESS— fullyidentified，whichwerebelongedto17correspo