子宫颈癌组织中p16CDK4cyclin D1通路的表达及意义.docVIP

精品论文 参考文献 子宫颈癌组织中p16CDK4cyclin D1通路的表达及意义 石彩歌（广东省珠海市妇幼保健院 广东珠海 519000） 【摘要】目的 探讨p16 、CDK4和cyclinD1等细胞周期调控因子在子宫颈癌发生发展中的作用。方法 收集36例子宫颈癌及10例正常子宫宫颈组织的临床标本，采用免疫组织化学法及western blot方法，检测p16、CDK4和cyclinDl的表达情况，并结合随访资料进行相关性分析。结果 36例子宫颈癌中，p16阳性表达率为52.8％，显著低于正常子宫宫颈组织的表达（Plt;0.05）。子宫颈癌中CDK4和cyclinDl的蛋白表达明显高于正常组织。p16表达与子宫颈癌淋巴结转移有密切关系（Plt;0.05）。结论 p16/CDK4/CyclinD1通路蛋白的异常表达和子宫颈癌的发生密切相关，p16的表达量可作为子宫颈癌淋巴转移的判断指标之一。 【关键词】 子宫颈癌 p16 CDK4 cyclin D1 淋巴结转移 子宫颈癌是严重危害妇女健康的常见肿瘤之一，占女性生殖系统恶性肿瘤的首位。子宫颈癌具有发展慢、发病隐匿的特点，早期可无明显症状，且该肿瘤的预后与其临床生物学特性密切相关。因此寻找有效的肿瘤标志物是子宫颈癌得以早期诊断进而提高治愈率和生存率的关键。研究表明，淋巴结转移与子宫颈癌预后密切相关，如何有效预测子宫颈癌患者淋巴结转移情况是亟待解决的临床问题。大量研究表明，细胞增殖是肿瘤形成的重要特征，而细胞周期相关蛋白是调控细胞增殖的关键蛋白。p16基因属于周期依赖性激酶抑制因子(Cyclindependentkinaseinhibitor,CDKI)基因家族，定位于人染色体9p21，其蛋白产物调节细胞增殖与凋亡，阻止DNA损伤的细胞进行分裂、增殖。p16基因是多肿瘤抑制基因，其正常表达阻止细胞周期的演进。研究表明，大多数肿瘤细胞株和许多实体或非实体肿瘤中都存在p16基因异常。CDK4/CyclinD1是细胞增殖的正调控因子，是影响肿瘤细胞增殖的重要因素。研究发现，p16/CDK4/CyclinD1通路在肿瘤发生发展过程中起到重要的作用，且这些蛋白在不同肿瘤中表达存在差异。为了探讨p16/CDK4/CyclinD1通路在子宫颈癌中的表达及意义，我们设计并开展了以下实验。 一、材料与方法 1.1一般资料：收集我院2009-2011年间资料完整的子宫颈癌术后石蜡包埋标本36例，取其中30例距肿瘤下边缘2cm以内的子宫组织标本作为对照；同时对10例子宫颈癌患者的正常直肠组织进行检测。在36 例子宫颈癌中，随访发现淋巴转移的患者10例。 1.2免疫组织化学：所取组织行石蜡切片，采用SP法进行组织化学染色，SP试剂，兔抗p16多克隆抗体单购于santcruz公司。显微镜下观察控制染色时间。每批染色均设阳性及阴性空白对照。结果判断：阳性细胞中阳性蛋白染色为背景清晰的棕黄及棕褐色，可分布于胞质与胞核。以阳性细胞数lt;25%为阴性（-），阳性细胞数25%～50%为弱阳性（+），50%～70%为阳性（++），gt;70%为强阳性（+++）。利用细胞计数法每例均随机选取5个高倍视野，连续观察1000个细胞p16阳性细胞数。取其均值换算成百分率即p16阳性指数。 1.3 蛋白提取和western blot：组织裂解液裂解组织，4℃温度下超声波破碎获得组织匀浆，然后以13,000g离心15min。取上清液作为把样品。样品在SDS胶中电泳，NC膜印迹转移。兔抗p16单克隆抗体，兔抗CDK4单克隆抗体和兔抗CyclinD1单克隆抗体均购于Sant cruz公司。一抗按1:1000稀释比例用0.01M PBS稀释，阴性对照以1%BSA取代一抗。加入辣根过氧化物酶偶联的鼠抗兔二抗，按照1:2000比例稀释。显色后以Image J软件分析图形。 1.4 统计学处理：所有结果均使用SPSS13.0进行统计分析。 二、结果 2.3 p16与子宫颈癌恶性转化及淋巴结转移的关系 表1 p16阳性细胞数与恶性子宫颈癌淋巴结转移关系 两组比较存在统计学差异（P＜0.05） 三、讨论 p16蛋白是细胞周期调节的重要因子，控制细胞的生长和分化，对细胞增殖周期起负调节作用。近年研究发现，p16基因是一种肿瘤抑制基因，参与多种肿瘤的发生过程。研究报道，p16能特异地抑制细胞周期素依赖性激酶CDK4的活性，从而阻止细胞由G1期进入S期。当p16表达降低时，CDK4可表达上调，与cyclinD1结合从而促进细胞有丝分裂，促进细胞