制备rna标定cdna加入dnaarray.ppt

基因微陣列技術在臨床醫學上的應用 第 9 單元 【本著作除另有註明外，採取創用CC「姓名標示－非商業性－相同方式分享」台灣2.5版授權釋出】 名詞解釋 基因微陣列技術 ( DNA Microarray) 臨床醫學 基因微陣列技術 又稱為生物晶片 高科技製品，結合分子生物學、材料學、電機、微計算…。 可以用來快速偵測單一基因庫(Genome)內的所有基因表現。 基因微陣列技術 晶片載台 DNA 探針 目標 DNA (cDNA) 基因微陣列技術 應用的方面很廣： 1. 可以用來偵測單一種細胞的改變 營養充足跟不足時的脂肪細胞 2. 用來比較正常細胞以及不正常細胞的差別 肝細胞以及癌化肝細胞的差別 3. 可以比較不同種類的細胞的差異 血管細胞椅及肌肉細胞的差異 基因微陣列技術 原理介紹-以正常細胞比較癌化細胞為例子。 Guillaume Paumier (user:guillom) RNA from normal tissue 製備 RNA 標定 cDNA 加入 DNA array RNA from cancer tissue 製備RNA 標定 cDNA 加入 DNA array 由DNA晶片找尋癌症(或疾病)特一基因之簡圖 正常組織RNA 病人組織RNA 生物資訊 發現相關基因 出自WIKIPEDIA 出自WIKIPEDIA 將尋獲之基因加入癌細胞製成細胞株 X 操控基因X 或 X 過度表達X基因細胞株 x 壓抑表達X基因細胞株 測試製成細胞株之特性 X 過度表達X基因細胞株 x 壓抑表達X基因細胞株 比較測試 細胞複製速度 細胞移行速度 細胞蛋白酶分泌…… 等癌細胞之特徵 測試新製成細胞株中基因表達之差異 製備 RNA 標定 cDNA 加入 DNA array 製備RNA 標定 cDNA 加入 DNA array X 過度表達X基因細胞株 x 壓抑表達X基因細胞株 尋找表達差異之基因以了解參與調控之機制 ?MBerth 臨床醫學 臨床醫學（Clinical Medicine）主要是根據基礎醫學的基礎，對病患的問題(有關身體或心理的疑問、不適或疾病)加以診斷、治療的學科。 Wikipedia 醫學字典的說明是「實際觀察及治療患者的有關事項或所見，有別於理論或實驗（pertaining to a clinic or to the bedside; pertaining to or founded on actual observation and treatment of patients, as distinguished from theoretical or basic sciences.）」 實例說明 /content/53x2238 版權聲明頁1 各位同學大家好 我們今天的上課主題是基因微陣列技術在臨床醫學上的應用 * 進入課程主題前，先為各位介紹一些專有名詞。 1. 基因微陣列技術 2. 臨床醫學 * 何謂基因微陣列技術？ 基因微陣列又稱為生物晶片。 自工業革命以來所有領域發展到現今的高科技結晶。 需要分子生物學的概念、材料學的應用加上電機計算上的運算，方能運作。 價格不便宜，目前市場上仍難以實現客製化，希望有朝一日可以將成本降低，便可以客製化應用。 基因微陣列最主要的功能便是可快速偵測基因庫內所有基因的表現。 此圖手上的東西便是生物晶片。 * 先跟各位介紹一下他的運作原理： 生物晶片基本上就是再由特殊材質製作而成的載台上鍍上一層DNA探針， 這些DNA探針是我們已知的基因序列(因為人類基因體計畫的完成)。 然後用待測樣本內的cDNA(目標DNA)與之反應，今天假使在該樣本內有基因X的高度表現， 那麼就會有比較多的該基因cDNA可以跟基因X探針接合(紅色框框)。 藉由接合的量來分析，便可以判斷哪些基因表現較多哪些較少。 * 基因微陣列的應用面很廣 比方說 我們可以用來比較單一種細胞在不同情況下的基因表現差異，如比較在養份足夠下的脂肪細胞以及養分不足時的脂肪細胞。 也可以比較正常細胞與不正常細胞間的差別，如比較正常肝細胞以及癌化的肝細胞。 也可以比較不同種類細胞的差異，如比較寫管細胞以及肌肉細胞的差別。 * 我們以正常細胞比較癌化細胞的方式來簡介基因微陣列的原理。 如圖所示。左邊為癌化的細胞右邊為正常細胞。 我們把癌化細胞分離出來的所有目標DNA加上紅色的螢光標定物。 另一方面，在正常細胞內的則加上綠色標定物。 把兩種分離的目標DNA使用同一片晶片分析，可以得到如右圖的結果， 可以知道每一個基因在正常與癌化細胞之間表現量的不同。比方說如果是綠色就表示該基因只在正常細胞表