盐藻中耐盐碳酸酐酶Dca的纯化及其消光系数测定.pdf

2011年 9月 四川大学学报 (自然科学版) Sep． 2011 第 48卷 第5期 JournalofSiehuanUniversity(NaturalScienceEdition) Vo1．48 No．5 doi：103969／j．issn．0490—6756．2011．05．035 盐藻中耐盐碳酸酐酶 Dca的纯化 及其消光系数测定 张 勇，蒋 彦 (四川大学生命科学学院生物资源与生态环境教育部重点实验室，成都 610064) 摘 要 ：本研究将碳酸酐酶Dca片段插入原核表达载体 pET21b中并转化大肠杆菌 Origami B(DE3)pLysS，由IPTG诱导表达带有组氨酸标签的融合蛋 白，并经镍柱亲和层析方法获得 纯化的Dca，通过 p-NitrophenylAcetate测活(pNPA)结果显示具有活性 ，为 Dca结构与功能 的研 究提供 了足量的蛋 白质保证．纯化 出的蛋 白质利用 Edelhoch方法测定其摩 尔消光系数 (molarabsorbancecoefficient)e，结果显示比预测的摩 尔消光系数值偏小． 关键词 ：Dca；亲和纯化 ；摩 尔消光系数 中图分类号：Q814 文献标识码：A 文章编号：0490—6756(2011)05—1169—05 Purificationand ￡determinationofhalOt0lerantDcafrom thealgaDunaliellasalina ZHANGYong，JIANG Yah (KeyLaboratoryofBio-resourceandEco—environmentofMinistryofEducation， CollegeofLifeSciences，SichuanUniversity，Chengdu610064) Abstract：Toobtain stable，activerecombinantDcaandprovideaaccurateconcentrationdetermination forthesubsequentresearch，fulllengthcDNA ofDcawasconstructedintoprokaryoticexpressionvector pET21bandtherecombinantplasmidwastransferredintoOrigamiB(DE3)pLysS．Expressionofthe targetproteinwasinducedwith IPTG andpurifiedundernativeconditionsusing theNi—NTA agarose column．TheactivityofDcawasverifiedthroughtheenzymaticassaywithpNPA (p—NitrophenylAce— tate)andtheproductionofenoughDcapavesthewayforthefunctionalandstructuralstudy．Basedon theEdelhochmethod，~(molarabsorbancecoefficient)wasdeterminedandthemeasurementofDcaof— fersanaccurateconcentrationdeterminationofthisproteininpursuingdetailedstudies ． Keywords：Dca，affinitypurification，molarabsorbancecoefficient