CD133慢病毒表达载体和SGC7901-CD133细胞株的构建.pdfVIP

·1012· -实验研究· CDl 33 33慢病毒表达载体和SGC7901一CDl 细胞株的构建 朱优龙姜渡健王守练 吴巨钢俞继卫 【摘要】 目的构建CDl33慢病毒表达载体，建立稳定过表达CDl33的人胃腺癌SGC7901细 胞株。方法聚合酶链反应法扩增CDI 33基因全长序列，将序列插入pGMLV—PBl—1载体，构建 pGMLV—PBl—1一CDl33慢病毒表达载体，随后转入293T细胞中对慢病毒进行包装，用获得的慢病毒毒 液感染人胃腺癌细胞株SGC7901。建立稳定过表达CDl33的SGC7901细胞株。荧光显微镜下观察 blot法 pGMIN．PBl—1一CDl33慢病毒表达载体的转染效果，逆转录．聚合酶链反应(RT—PCR)和Western mRNA 3种细胞中CDl33 检测了SGC7901、pGMLV—PBl一l—SGC7901和pGMLV—PBI—l—CDl33一SGC7901 及蛋白的表达水平。结果 经限制性内切酶鉴定及测序分析，我们成功构建了pGMLV—PBl-1一 CDl33慢病毒表达载体质粒。Westernblot结果显示，pGMLV—PBl—1．CDl33慢病毒表达载体质粒成 功转染293T工具细胞，pGMLV—PBl—1一CDl33慢病毒表达载体有较好的过表达效果。pGMLV—PBl—1一 SGC7901和pGMLV—PBl．1一CDl33一SGC7901细胞在荧光显微镜下均发出绿色荧光，并且转染效率高。 RT．PCR和Western blot检测显示，与对照组比较，转染pGMLV—PBl—1一CDl33慢病毒表达载体组的细 胞，CDl33的表达在mRNA和蛋白两个水平均显著提高(1．160±0．051、0。835±0，077)，差异有统 计学意义(P0．01)。结论成功构建CDl33慢病毒表达载体和SGC7901一CDl33细胞株。 【关键词】 胃腺癌；CDl33；慢病毒载体；转染 ofa vectorestablishmentofits transfected ConstrucfionCDl33lenfivirM and expression stably line SGC7901cell Zhu Youlong，JiangBojian，WangShoulian，WuJugang，yuJiwei．Departmentof General ofMed如ine，ShanghaiJiaotongUniversity， Su增eu，Shanghai孤i以People’SHospital，School Shanghai201999．China Correspondingauthor：YuJiwei，Email：fiweiyu919@hotmail，com ToconstructaCDl33lentiviral vectorandtoestablishits 【Abstract】0bjective expression stably transfectedSGC790lcellline．Metllmls CDl33 reverse Full—lengthgeneamplifiedby transcription—poly— intoa vectortoconstruct merasec