人B细胞淋巴瘤白血病-2基因质粒体的构建和表达及B细胞淋巴瘤白血病-2基因在U251细胞中的作用.pdfVIP

·108· ·实验研究· 人B细胞淋巴瘤／白血病一2基因质粒体的 构建和表达及B细胞淋巴瘤／白血病一2 基因在U251细胞中的作用 刘岳 陈谦学 田道锋刘宝辉吴立权 【摘要】 目的构建人B细胞淋巴瘤／白血病．2(bcI．2)基因质粒体并检测其在胶质瘤细胞株 U251内的表达。方法 构建PEGFP-bcl-2质粒体，应用FuGENEHD转染质粒体进人U251，G418 筛选，挑出单克隆扩增，建立稳定细胞株N1．U251和bcl_2．u25l。将实验分为：空白组(u251细胞)、 组(N1一u251)’bel-2组细胞活性。结果PEGFP-bcl．2质粒体构建成功，N1一U251、bcl-2．U251稳定细 胞株构建成功，在空白组、N1组、bcl-2组bcl_2蛋白表达量分别为：0．012±O．003、0．01l±0．003、 0．115±0．025。细胞活性分别为：1．015±0．005、1．120±0．004、3．312±0．004，bcl-2组与对照组比 较差异有统计学意义(PO．05)。结论成功构建人bcl．2质粒体并建立高表达bcl-2的细胞株，高 表达bcl一2可以提高U251细胞活性。 【关键词】B细胞淋巴瘤／白血病-2；胶质瘤；质粒 Co璐tmc伽nof ofB aⅡdits inU251ceUs pl嬲midlymphocyt幅／l伽kemia-2expre鹃ion柚d劬ction 丘Mm，cknQ缸似船，死onD咖ng，厶u B∞^Mi，阢‘伪啪n．D印。n，抛眦Q厂^k啪sⅡrgev，mnm加 协s础ofo厂耽矗口凡‰池rs卯．阢胁n私DD6D．吼池 co丌邯po枷埘。砒or：Cknp缸似耻，Emn订：ck御崩酌@so^u．com To the construct ofB ob- 【AbStI佻t】objectiVe plasmid1ymphocytes／leukemia-2(bcl．2)aJld serveits inU251 cells．MethodsPlasrIlidofbcl一2wasconstⅢctedandtmnsfectedintoU251 exDression cellsFUGENEHD．G418wasusedtoⅫthecellsthatweretr锄sfected by unsucessfullv．Westemblotting chain a11dreversetranscriptasepolymerasereaction(RT．PCR)wereusedtoobservetlleexpressionofbcl一2． nree wereset aIIdbcl-2 thiazol groups up：contml刚p，N1group group．Methyltetrazolium(mT)assay was to ofU251 inNl usedmeas眦the cells r1111e PEGFP． viability groupaJldbcl．2舯up．Re训tsplasITlid bcl一2aJldbcl一2．U251 cellswereconstmcted ofbcl_2incontrol successfuUy．7I’heexpression group，N1舯up aJld was aIId the ofU25l bcl-2舯up0．012±0．003，0．Oll±O．0030．115±O．025，aIldviabilitv cells啪s and