单链TCR分子的构建与酵母表面展示.pdfVIP

广东药学院学报 Pharmaceutical Journalof Jun．2010。26(3) Guangdong College 单链TCR分子的构建与酵母表面展示 邵红伟，郭亨彭，黄晓露，张文峰，黄树林 (广东药学院生命科学与生物制药学院／生物制药研究所，广东广州510006) 摘要：目的构建单链T细胞抗原受体(scTCR)，借助酵母展示载体对其进行表达和展示，并确定优化的 展示时间点。方法利用融合PCR(fusionPCR)通过linker将TCR分子两条链的可变区连接在一起，构 建成scTCR，并克隆入展示载体pYDI；转化酵母细胞后，通过激光共聚焦显微镜观察scTCR的表达情 况，并利用流式细胞仪测定其表达曲线；洗脱酵母细胞表面的蛋白质，通过点杂交检测进一步确定 scTCR的表达。结果scTCR被成功地构建和克隆；转化酵母细胞后，激光共聚焦检测表明其分布在酵母 细胞的表面，流式细胞检测表明scTCR在诱导24h左右在酵母细胞表面的展示比例达到峰值；对酵母 表面洗脱蛋白的点杂交检测进一步表明了scTCR的表达和展示。结论所构建的scTCR能够有效地表 达并展示在酵母细胞表面，为下一步构建scTCR酵母展示库并确定最佳的表达诱导和筛选时机奠定了 良好的基础。 关键词：酵母展示；单链T细胞抗原受体；构建 812文献标识码：A 中图分类号：Q doi：10．3969／j．issn．1006—8783．2010．03．023 文章编号：1006—8783(2010)02—0305一05 Theconstructionand surface of chainTceH yeast displaysingle receptor(scTCR) SHAO Xiao·lu，ZHANG Shu-lin Hong·wei，GUOHeng—perlg，HUANG Wen—feng，HUANG (School and Pharmaceutical of蜘SciencesBiopharmaceutics，GuangdongCollege，Guangzhou，Guangdong 510006，China) Toconstructthe chainTcell itonthesurfaceof Abstract：Objectivesingle receptor(scTCR)anddisplay to the time forthe ofscTCR．MethodsTwovariable ceUs，and point regions yeast identifyoptimal display ofTCRwereconnectedthelinkerfusionPCRtoconstruct Was by scTCR，which through consequendy clonedintothe vector ofscTCRWasdeterminedconfocallaser yeastdisplay pYDI．The by expression the CUlt～ewas basedonthe in scanningmicroscope(CLSM)，andexpression produced changesexpression