马铃薯检疫性病毒的分子生物学检测技术进展.PDFVIP

维普资讯 2004年第3期 植物检疫 PLANTQUARANTINE 马铃薯检疫性病毒的 分子生物学检测技术进展 张永江 赵文军 李明福 李 丹 (国家质检总局动植物检疫实验所 北京 xooo29) (贵州毕节地区植保植检站) 摘要 综述 了包括 RT-PCR、NASH、dsRNA分析、PCR微量板杂交、NASBA、DIAPOPS、LCR 等在 内的分子生物学技术在马铃薯病毒检疫中的应用。为快速、准确地定性或定量检测马铃 薯检疫性病毒，检测时应根据不同的实验条件、检测目的和检疫要求采用相应的方法。 关键词 马铃薯 检疫 病毒 分子生物学 马铃薯是世界上重要的农作物，但常受 清学外，开展了分子生物学检测方面的工作。 病毒危害而遭受严重损失。马铃薯的经济地 本文是近年来在马铃薯病毒检疫中应用的分 位、贸易全球化形式及病毒病对马铃薯生产 子检测技术的概述。 的危害推动了国内外马铃薯检疫工作的开 1 马铃薯上具有检疫重要性的病毒 展。为了防止危险性病毒传人我国，检验检 根据我国发布的进出境植物上有害生物 疫部门在加强检疫监管的同时，也在大力提 检疫名录及双边协定书中的内容，马铃薯上 升我国病毒的检测水平。除常规生物学及血 重点检疫的病毒如下(表 1) 。 表1 马铃薯上重点检疫病毒 1．中美、中加、中荷双边检疫议定书规定的检疫性有害生物。 2 马铃薯检疫性病毒分子检测技术 PCR。与传统生物学及 ELISA相比，它具有 2．1 RT-PCR技术 简便、灵敏度高、特异性强、重复性好等优点。 PCR是一种体外扩增DNA技术，大多数 目前该技术已分别应用于PMTVE、P、rA[、 植物病毒为RNA病毒，需要将 RNA反转录 pVYE 、TRVE的检测。 成cDNA再进行 PCR反应，此方法称为 RT- 一 步法RT-PCR使逆转录和PCR在同一 收稿 日期：2003—10—09，2003—12一l8修回 一 l67 — 维普资讯 2004年第3期 植物检疫 PLANTQUARANTINE 管中顺次进行，减少了工作量，提高了检测效 样品的检测。 率。关翠萍 等用此法检测了马铃薯中的 2．3 dsRNA分析技术 P、厂Y、PVX和 PLRV，表明该法较两步法 RT- dsRNA检测技术以RNA病毒在寄主体 P(灵敏度高 100倍左右。 内存在的特异 dsRNA各 自不同的迁移率、分 免疫诱捕反转录PCR(immunocaptureRT． 子量及片段数为检测病毒的依据¨，可用于 PCR，IC．RT_PCR)是先用特异性抗体捕获相 新病原病毒、同一病毒不同株系或分离物、病 应的病毒，然后进行核酸抽提和 RT-PCR，使 毒RNA及类病毒的鉴定。Yamashita等 以 检测的特异性增强，并可避免组织中单宁、多 PXV、，Ⅱ V、TRV、ArMV(南芥菜花叶病毒)、 糖等物质对 PCR的抑制作用。Rantanen_7等 CMV(黄瓜花叶病毒)、GFlJV(葡萄扇叶病毒) 以PMTV芬兰分离物Fin2b制备多克隆抗体， 等为检测 目标对 dsRNA检测技术在植物检 以苏格兰分离物