对手足口病患儿咽拭子病原体柯萨奇病毒A10和A6的鉴定分析.docVIP

精品论文 参考文献 对手足口病患儿咽拭子病原体柯萨奇病毒A10和A6的鉴定分析 DOI：10.7504/nk2016010203 中图分类号：R587.1 文献标识码：A 　　摘要：目的 研究分析鉴定手足口病患儿咽拭子病原体柯萨奇病毒A10和A6的结果。方法 可以随机选取50例医院在2013年1月到2015年1月期间收治的手足口病患儿，通过采集患儿的咽拭子作为标本，对能够引起手足口病的病原体柯萨奇病毒开展鉴定分析，具体可通过 BLAST 程序，分析其 A10和A6产生的影响。结果对手足口病患儿咽拭子病原体柯萨奇病毒A10和A6进行分析，得出在患儿咽拭子病原体柯萨奇病毒引物 040-011 能够对 A10 和 A6 产生良好的基因扩增特异性；手足口病男性患儿咽拭子病原体柯萨奇病毒检测阳性率达到52.3%，女性病原体柯萨奇病毒检测阳性率达到13.8%，对比存在差异（Plt;0.05）；其中，在原体柯萨奇病毒检测中，检测到12例为A10阳性, 3 例为A 6阳性，同时病毒中A10阳性、A 6阳性的比例分别是24.0%、6.0%，对比存在差异（Plt;0.05）；同时A10 和 A6也是手足口病患儿的重要病原。结论 在临床诊治鉴定手足口病过程中，可以根据患儿咽拭子病原体柯萨奇病毒A10和A6鉴定结果，强化手足口病病原检测工作，通过A10、A6变化来为患儿制定有效治疗决策，以确保提升临床手足口病治疗方案效果。 　　关键词：咽拭子病原体、手足口病、A10、A6、柯萨奇病毒 　　相关医学文献指出，针对临床手足口病治疗中，由于该病有一定的传染性，且3 岁以下的儿童群体多发手足口病，不仅能引起患儿的手、足、口部位出现疱疹，严重的也会引发患儿出现肺水肿、心肌炎以及循环障碍等并发症，影响患儿身体健康。对此，加强手足口病患儿咽拭子病原体柯萨奇病毒监测鉴定工作，提高临床中对病原体病毒监测的敏感性，会成为目前临床中控制该病的关键因素。本研究针对医院收治的50例手足口病患儿，研究其临床资料，对对手足口病患儿咽拭子病原体柯萨奇病毒A10和A6检鉴定分析，以确保强化监测手足口病病原，制定良好的临床疾病诊治方案。 　　1 资料与方法 　　资料 　　对于医院在2013年1月到2015年1月收治的50例手足口病患儿进行研究，且患儿也均符合临床诊断手足口病疾病的标准[2]，其中男性手足口病患儿有21例，女性患儿则有29例，且患儿的年龄范围在1-12岁之间，患儿平均年龄是（6.5plusmn;0.3）岁，符合本次研究需求。 　　1.2方法 　　在手足口病患儿咽拭子标本的采集中，可以应用北京天根公司生产的病毒 RNA 提取试剂盒，根据说明书进行操作，提取患儿的咽拭子标本。然后可以将提取得到的 RNA 溶在 60 mu;l Rnase - freedd H2O之中,将其放置在-20 ℃环境下进行低温保存。再者，可以对标本开展核酸检测，主要应用由中山大学达安基因股份生产的试剂，应用“聚合酶链反应-荧光探针体外扩增法”，对患儿的肠道病毒通用型（EV）、以及柯萨奇病毒进行核酸检测。同时，可以开展引物扩增分析，主要就是应用上海博尚生物有限公司合成的引物。其引物是： 　　CVA16编号：040:5prime;-AT G T AYRT ICCIMCIGGIGC-3prime;(2905 ～ 2924 ) 　　CVB1的编号： 　　然后，可以应用以上的引物，扩增咽拭子人肠道病毒(HEV)VP1 区的3prime;端核苷酸部分。 　　最后，将测得病毒部分 VP1 区 3prime;端的基因序列通过在线 BLAST 程序进行比对 , 以核苷酸序列 M ax i dent 大于75 %的最大值鉴定血清型。 　　1.3评定标准 　　分析手足口病患儿咽拭子病原体柯萨奇病毒A10和A6检测阳性率，若是检测标本中，其扩增曲线没有出现对数增长期，或是其阈值（Ct）＞35 ，就表示为阴性；若检测标本中 Ct＜35 ，且引物的扩增曲线产生显著的对数增长期，则可表示为阳性。 　　1.4统计处理 　　针对本次研究的结果，应用统计学SSPS20.0版本软件处理，对于其中的计数资料，能够用率%来进行表示，行x2方面检验；且以Plt;0.05结果表示有统计学意义。 　　2结果 　　2.1对比病毒中A10 、 A6阳性率鉴定情况 　　在本次鉴定分析中，通过对手足口病患儿咽拭子中的病原体柯萨奇病毒开展A10、A6鉴定分析，并通过利用 040-011引物对病原体开展RT-PCR扩增分析,从而能够得到长度约为 400 bp的VP1 区 3prime;核苷酸 。 经运用在线BLAST 程序进行比对 ,得出在患儿咽拭子病原体柯萨奇病毒引物 040-011 能够对 A10 和 A6 产生良好的基因扩增特异性