微生物试验 抑菌效果预测.pptVIP

第五小组：兰玉蓓 张冬 吴立音 富爽爽 前言 抗病原体药物 抗生素 消毒剂 防腐剂 （ 1?）作用机理的选择性 抑制细胞壁合成、干扰细胞膜、抑制蛋白质合成、抑制核酸合成 抗菌效果：抑菌、杀菌和溶菌 （?2?）对微生物有选择性：青霉素对多种革兰氏阳性细菌都有良好药效，链霉素对多种革兰氏阳性和阴性细菌都有良好药效，对结核杆菌有特殊的疗效；氯霉素、四环素、金霉素、土霉素对G-和G+、立克次氏体、衣原体均有作用，属于广谱型抗生素；放线菌酮、两性霉素B、灰黄霉素对真菌有抑制作用。 （?3?）一般都在很低浓度下对病原菌就发生作用 有效浓度：抑制微生物生长的最低浓度。 低强度抗生素：有效浓度≥100?mg/L? 高强度抗生素：有效浓度≤1?mg/L? 在这么多抗病原体药物中， 到底哪种药物的抗菌效果最好呢？ 本次实验，我们选取了氨苄青霉素、链霉素、红药水、丙酸，分别对大肠杆菌（G-）、枯草芽孢杆菌（G+）作用，比较它们的抗菌效果 氨苄青霉素是杀菌性的抗生素。能渗透革兰氏阳性菌及部份革兰氏阴性菌。经由结合在细菌细胞壁上的青霉素结合蛋白（penicillin-binding proteins，PBPs），阻碍细菌合成细胞壁的第三及最后阶段，最终引致细胞裂解。 链霉素主要与原核细胞(如 细菌)核糖体30S亚单位结合，抑制细菌蛋白质(酶)的合成,使细菌不能正常生长或者代谢而死亡。 红药水红药水的有效成分是汞溴红，其中的阳离子汞能与细菌蛋白质结合，影响细菌的代谢过程，从而达到抑制细菌生长的目的。 丙酸的防霉机理目前公认的有两个 1、非解离的丙酸活性分子在霉菌细胞外形成高渗透压 是霉菌细胞内脱水而失去繁殖能力 2、丙酸活性分子可穿透霉菌细胞壁，抑制细胞内的酶活性而阻止霉菌的繁殖 待测菌种：大肠杆菌（G-），枯草芽孢杆菌（G+） 药剂：抗生素类药物——氨苄青霉素、链霉素 (50μg/μL) 消毒剂和防腐剂——红药水、丙酸 材料：LB培养基，移液枪100uL，培养皿20个， 小试管32支(20mL)，移液枪（蓝、黄枪头 各一盒），滤纸片100个，生理盐水，高 压蒸汽灭菌锅，150ml锥形瓶4个， 500 ml锥形瓶2个，酒精灯，接种环。 1、配制培养基： LB固体培养基： 蛋白胨10g/L (1g/100mL) 牛肉膏5g/L (0.5g/100mL) 琼脂6g/L (0.6g/100mL) NaCl 10g/L (1g/100mL) 调pH 7.0~7.2 与生理盐水、移液枪置于高压蒸汽，灭菌。 2、稀释：（如下表） 氨苄青霉素： 浓度 5ug/mL 10ug/mL 50ug/mL 250ug/mL 1250ug/mL 水 2mL 1mL 199uL 156uL 105uL 氨苄青霉素 1uL 1uL 1uL 4uL 15uL  链霉素： 浓度 5% 10% 50% 80% 100% 水 152uL 180uL 75uL 120uL 0uL 红药水 8uL 70uL 75uL 30uL 150uL 浓度 0.08% 0.4% 2% 10% 50% 水 1249uL 249uL 147uL 180uL 75uL 丙酸 1uL 1uL 3uL 20uL 75uL 浓度 4ug/mL 20ug/mL 100ug/mL 500ug/mL 2500ug/mL 水 2mL 1mL 180uL 190uL 150uL 链霉素 1uL 1uL 2uL 10uL 40uL 红药水： 丙酸： 3、混菌：（45℃时）将大肠杆菌、枯草芽孢杆菌接种至培养 基并注入培养皿，混匀，自然冷却至凝固。 平板个数：20mL/皿*20个 4、点样：用移液枪分别移取30uL 所选试剂，如下图点 样，第一个皿点四种药 物的最低浓度，其余四 个皿依次按浓度梯度点 样，中心滤纸点生理盐 水，为空白对照，并重 复一皿。（2菌种*2.5 皿/1菌*4药品） 药1 对照 药4 药3 药2 5、培养： 37℃下培养20h，观察。测抑菌圈直径，做直径-药剂浓度对数曲线。 6、配置菌悬液： 分别取一定量大肠杆菌、枯草芽孢杆菌制作菌悬液。