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皮肤科免疫荧光技术
皮肤科免疫荧光技术 河北医科大学第二医院皮肤科 郭兵申 免疫荧光技术概述 原理 将不影响抗原抗体活性的荧光色素标记在抗体（或抗原）上，与其相应的抗原（或抗体）结合后，在荧光显微镜下呈现一种特异性荧光反应。 分类 直接法：将荧光素标记的抗体与标本中的抗原直接结合进而荧光反应。 间接法：将荧光素标记的抗抗体与相应的特异性抗体抗原复合物反应，形成抗原-抗体-抗抗体复合物体系，进检测的一种特异性荧光反应。 免疫荧光原理示意图 临床常用荧光素染料 ⑴异硫氰酸荧光素（FITC） λ吸=490--495nm 、λ发=520--530nm、黄绿色荧光 ⑵四乙基罗丹明（RIB200） λ吸=570nm、 λ发=595～600nm、呈橘红色荧光 ⑶四甲基异硫氰酸罗丹明（TRITC） λ吸=550nm、 λ发=620nm、呈橙红色荧光 皮肤直接免疫荧光检测 适应症： 非感染性大疱性皮肤病 天疱疮、类天疱疮、疱疹样皮炎、线状IgA大疱性皮病、获得性大疱性表皮松解等 结绨组织病：如红斑狼疮等 各种血管炎 皮肤肿瘤 某些感染性皮肤病 操作方法及流程 放入生理盐水送检 手术取材 ?外观正常未受累皮肤 ?直径1-2mm带疱皮损 （米粒大小水疱） ?直接荧光患者标本采集 操作方法及流程 冰冻切片、染色、镜检 组织修材，成适合冰冻包埋块的大小 冰冻切片 抗原与荧光抗体结合 荧光显微镜下镜检及成像，打印报告 操作方法及流程 间接免疫荧光染色步骤 操作方法及流程 实验室操作图片 直接荧光组织修材 冰冻切片 实验室操作图片 荧光染色 水浴箱孵育
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