双缩脲法测定血清总蛋白.pptVIP

* 双缩脲法测定血清总蛋白 临床生化实验室 一、实验目的 掌握双缩脲法测定血清总蛋白的原理及操作。 了解血清总蛋白测定的临床意义。 二、实验原理 尿素被加热，则两分子的尿素放出一分子氨而形成双缩脲。双缩脲在碱性环境中，能与硫酸铜结合成紫红色的化合物，此反应称为双缩脲反应。 二、实验原理 蛋白质分子中含有肽键（—CO — NH — ）与双缩脲结构相似，故也能进行此反应。双缩脲反应可作为蛋白质定量测定的依据。 二、实验原理 紫红色络合物在波长为540nm处的吸光度与溶液中蛋白质的含量在一定范围内成正比关系，经与同样处理的蛋白质标准液比较，即可求得溶液中蛋白质的含量。 C测 = —— × C标 A测 A标 三、实验操作 混匀，置25 ℃水浴放置30min或37℃水浴放置10min，以空白管调零，在540nm波长处进行比色，分别读取各管的吸光度值。 四、结果计算 计算公式： 血清总蛋白（g/L）= ———— ×C标 AU- ARB- AB AS-ARB 参考范围： 正常人：60~80g/L 五、方法学评价 目前常用的测定血清总蛋白的方法有如下五种经典方法： 　双缩脲法（Biuret法）：1~2mg 定氮法：灵敏度0.2~1.0mg 　Folin－酚试剂法（Lowry法）：50~100μg 　紫外吸收法：5μg 　考马斯亮蓝法（Bradford法）：1~5μg 五、方法学评价 双缩脲法优缺点： 优点 操作简单，使用方便，作为临床测定血清总蛋白的首选常规方法且重复性好。 缺点 灵敏度较低，比酚试剂法低100倍左右。 六、临床意义 血清总蛋白降低 1、蛋白合成障碍：肝功能严重受损 2、蛋白质丢失增多：严重烧伤，大量血浆渗出； 大出血；肾病综合症等 3、营养不良或消耗增加：如低蛋白饮食；慢性消耗性疾病：结核病、恶性肿瘤等 4、血浆稀释：静脉注射过多低渗溶液或各种原因引起的水钠潴留。