天然药物化学基础第二章第三节.ppt

步骤：制板→点样→展开→显色→Rf值计算 点样： 先用铅笔在距薄层板一端1cm处轻轻划一横线作为基线，然后用毛细管吸取样品，在起始线上小心点样，斑点直径一般不超过2mm。 点样要轻，不可刺破薄层。 * 步骤：制板→点样→展开→显色→Rf值计算 展开： 将薄层板放入适宜的展开缸内展开。展开剂液面不要超过薄层板的基线。 显色： 自然光下观察、紫外光下观察、化学试剂显色。 * Rf值（比移值）计算： Rf值= 从基线至样品斑点中心的距离 从基线至展开剂前沿的距离 成分1= d1 d 成分1= d2 d * 利用同一种化学成分在相同的色谱条件下Rf值相同进行定性检识 Rf值（比移值） * 只能在0~1之间 当Rf值为0时 表示组分留在原点未被展开，即组分在固定相上保留很牢固，组分完全不溶于流动相，不随之移动。 当Rf值为1时 表示组分随展开剂移动至前沿，完全不被固定相保留。 展开剂极性过小 展开剂极性过大 Rf值在0.2~0.8为宜，最佳范围是0.3~0.5 练习： 比较下列化合物在吸附薄层色谱中的Rf值大小 定性检识的依据： 同一种化学成分在相同的色谱条件下Rf值相同。 OH A B OH HO C Rf值：BAC * 思考 在薄层色谱中，以硅胶为固定相，氯仿为流动相时，试样中某些组分Rf值太大，若改为氯仿-甲醇（2：1）时，则该组分的Rf值会变大，还是变小，为什么？ Rf值会变大，因为流动相的极性增大 化合物A在薄层析上从原点迁移7.6cm，溶剂前沿距原点19cm，计算化合物A的Rf值。 思考 将被分离物质和吸附剂装入大小适宜的色谱柱中，以适当溶剂进行洗脱而使不同成分得到分离的色谱分离方法。 柱色谱常用的有吸附色谱和分配色谱两类。吸附色谱常用氧化铝和硅胶作固定相。 操作步骤： * a.干法装柱 b.湿法装柱 装柱要求： 均匀紧密； 无断层； 无气泡； * a.干法装柱 将选定的吸附剂经漏斗缓缓加入柱内，边装边用软物轻轻敲打色谱柱，使吸附剂压实，切勿将吸附剂一次性全部倒入柱中。 * b.湿法装柱 将吸附剂混悬在已选好的洗脱剂中装入柱内。 * ①样品易溶于洗脱剂 ②样品难溶于洗脱剂 将样品溶解于少量洗脱剂，制成高浓度溶液后慢慢上柱。 将样品溶解于少量甲醇或丙酮后，均匀拌入适量吸附剂（1:2~1:3），水浴挥干溶剂。均匀平铺至柱子顶端。 * ①梯度洗脱：洗脱剂极性从小到大。 ②洗脱剂液面高度始终要高于柱面。 ③控制洗脱剂流速为匀速。 ④有色成分收集各色带洗脱液。 ⑤无色成分则采用等分收集（一般为3倍柱体积） ⑥浓缩洗脱液，薄层检识后合并相同流分。混合成分则进一步分离。 * 分配色谱法是以液体做固定相，用与其不相混溶的的溶剂做流动相的液-液色谱法。 （一）基本原理 利用被分离成分在固定相和流动相中的分配系数不同。 易溶于流动相的成分，移动速度快。 易溶于固定相的成分，移动速度慢。 * （二）支持剂（载体、担体） 在分配色谱中起到支持和吸着一定量固定相的作用，本身无吸附作用。 要求：不与被分离成分反应。 不溶于两相溶剂中。 常用支持剂： 含水硅胶、硅藻土、纤维素、滤纸 * 分配色谱中的固定相和流动相： 固定相：被支持剂固定的溶剂，如水等称为固定剂。 流动相：与固定相不相混溶的另一相溶剂。 * （三）固定相与流动相 适用范围： 正相分配色谱：亲水性成分和弱亲脂性成分 反相分配色谱：强亲脂性成分 分配色谱的类型： 根据固定相和流动相相对极性大小不同： 正相分配色谱：极性：固定相流动相 反相分配色谱：极性：流动相固定相 * （1）正相分配色谱： 支持剂：硅胶等 （硅胶吸水＞超过17％，不作 吸附剂，而作为载体） 固定相：强极性溶剂，如水、缓冲液等 流动相：氯仿、乙酸乙酯等弱极性亲脂有机溶剂 洗脱规律：极性小成分先洗下 极性大成分后洗下 （2）反相分配色谱： 支持剂：硅胶、纤维素粉、滤纸等 固定相：亲脂性极性小的有机溶剂，可用石蜡油、 反相硅胶RP-18、RP-8、RP-2 流动相：则用水或甲醇等强极性溶剂 洗脱规律：极性大成分先洗下 极性下成分后洗下 分配色谱的类型 （四）操作技术 1、分配薄层色谱法 支持剂：惰性物质 固定相：支持剂吸附的溶剂 流动相：事先要用固定相饱和 装置及操作同吸附薄层色谱，区别在于制板用的是支持剂不是吸附剂。 * （四）操作技术 2、分配柱色谱法 ①先将支持剂和固定相拌匀 ②抽滤，除去多余的固定相（溶剂） ③将含有固定相的支持剂倒入流动相中饱和。 ④湿法装柱。 ⑤洗脱用的流动相在使用前用固定相溶剂饱和。 * （四）操