应用荧光PCR技术和细菌培养法检测孕妇产前B族链球菌感染的对比分析.docVIP

精品论文 参考文献 应用荧光PCR技术和细菌培养法检测孕妇产前B族链球菌感染的对比分析 刘睿 崔坤友 刘文彬 李珍宇 　　(东莞市清溪医院检验科 广东东莞 523660) 　　【摘要】目的 对比观察荧光PCR技术和细菌培养法用于产前筛查B族链球菌（GBS）感染的检验效果。方法 收集500例孕34-37周孕妇阴道肛门拭子，分别进行GBS核酸检测（PCR）及细菌培养检测，对比两种方法的阳性检出率、敏感性、特异性、准确性。结果 500例样本中，PCR技术检测GBS阳性43例，阳性率8.6%，细菌培养法检测GBS阳性26例，阳性率5.2%，差异有显著性（Plt;0.05）；与测序法对照，PCR技术正确占89.5%，细菌培养法正确占10.5%，差异有显著性（Plt;0.05）；PCR技术与细菌培养法的敏感性、特异性分别为100%、99.6%和61.0%、99.8%，二者敏感性差异显著（Plt;0.05）。结论 产前B族链球菌检测，PCR技术明显优于细菌培养法，其阳性率高、准确性大、敏感性好，检测速度更快。 　　【关键词】实时荧光PCR 细菌培养 B族链球菌 围产期 阳性率 敏感性 准确性 　　【中图分类号】R714.14 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2014）08-0198-02 　　B族链球菌（group B Streptococci,GBS）是围产期感染的重要病原菌之一，对围产期GBS进行临床筛查尤为必要[1]，我院从2012年起应用PCR技术进行GBS检测。本研究旨在同时进行PCR技术与细菌培养检测，对比观察GBS检测的阳性率、准确性、敏感度。 　　1.材料和方法 　　1.1 实验样本 　　收集2012年8月-2013年12月，孕35-37周来院检查的孕妇阴道直肠拭子500例，入选人群无感染性疾病，取样一周前未使用青霉素及其他抗生素。严格按照取样流程，同时采集两份标本，分别进行GBS细菌培养和应用PCR技术进行核酸检测，48小时内检测完毕。 　　1.2试剂、方法和仪器 　　1.2.1细菌培养 方法：将拭子上的细菌接种于5%羊血培养基中（接种时菌液在培养皿应尽量均匀地涂开），在37℃培养箱内进行24小时培养后，由菌落形态、溶血特性、显微镜下所见及生化反应可以确定链球菌，再采用族和型特异性血清进行免疫试验最后确定为GBS。 　　1.2.2 PCR方法：采用福建泰普生物科学技术有限公司B族链球菌核酸检测试剂盒（国食药管械（准）字2001第3400250号），仪器为LC480ⅡPCR仪（罗氏公司），本院PCR临床实验室经省临检中心验收合格。 　　标本处理：标本登记后4℃冰箱保存，检测前在拭子管中加入清洗缓冲液1ml，高速震荡2min，得到标本悬浮液；13000r/min离心5min，弃上清；再加1ml清洗缓冲液，13000r/min离心5min，弃上清，沉淀用100ul清洗缓冲液重悬，加入提取固形物，高速震荡5min破碎细胞，95℃干浴2min，立即冰浴5min，13000r/min离心1min，上清用于扩增。所有开盖操作在B2级生物安全柜中进行。 　　标本检测的其余操作步骤和PCR反应条件按说明书进行。GBS阳性判断标准：FAM荧光信号有明显S形扩增曲线，CT值小于33，Texas Red(内参)CT值小于40，且本批实验阳参、阴参检测结果符合预期。 　　1.2.3 测序法作为对照统计两种方法的敏感性、特异性、准确性。PCR法和培养法检测同时阳性或同时阴性则实验通过，如两种方法结果不一致，则扩增后进行测序验证结果。 　　1.3统计学分析 统计学处理由SPSS11.0软件包完成，采用卡方检验，Plt;0.05为差异有统计学显著性意义。 　　2.结果 　　2.1 500例孕妇中，PCR检测检出GBS阳性43例，阳性率8.6%；细菌培养检出GBS阳性26例，阳性率5.2%；两种方法同时阳性25例，同时阴性456例；PCR（+）/培养（-）18例，PCR（-）/培养（+）1例。PCR法与细菌培养法阳性率比较有显著性差异（Plt;0.05），见表1。 　　2.2 将19例荧光PCR法与细菌培养法结果不一致的样本用测序法鉴定后结果： 　　 1）PCR（+）/培养（-）的18例标本测序鉴定为B族链球菌序列的为16例，非B族链球菌序列的为2例。 　　2）PCR（-）/培养（+）的1例标本测序鉴定为非B族链球菌序列。荧光PCR法正确占89.5%，细菌培养法正确占10.5%，二者有显著性差异（Plt;0.05），见表2。 　　2.3 500例样本中PCR与细菌培养检测对照测序法的性能比较，PC