GluK2受体酪氨酸磷酸化突变体的构建及其功能研究.pdfVIP

China Science Technology Overview 学术研究 GluK2受体酪氨酸 磷酸化突变体的构建及其功能研究 朱秋菊 孙长城 王亿 侯筱宇 (江苏省脑病生物信息重点实验室 徐州医学院生物化学与分子生物学研究中心,江苏徐州 221002) 【摘　要】研究表明谷氨酸过度激活其受体是缺血性脑中风脑损伤的关键,KA受体的GluK2亚基参与了脑缺血再灌注引起的神经细胞的死亡。 然而,对于KA 受体在缺血性脑中风中的调节机制知之甚少。本室前期电生理膜片钳研究结果表明Src激酶通过介导GluK2的酪氨酸磷酸化上调KA 受 体的功能。本课题拟在探索GluK2酪氨酸磷酸化的修饰方式及进一步研究酪氨酸磷酸化修饰GluK2受体功能的调节。 【关键词】GluK2 酪氨酸磷酸化 Src激酶 缺血性脑损伤中,KA受体的持续激活与神经功能紊乱以及丧 表明酪氨酸磷酸化参与脑缺血后NMDA受体多种功能的调节。然 失具有密切关系。KA受体在中枢神经系统尤其是海马区广泛表达, 而,关于酪氨酸磷酸化是否参与调节Kainate受体的功能尚未见报 是由不同亚基组成的四聚体离子型谷氨酸受体,包括GluK1,2,3; 道。在哺乳动物中枢神经系统中,非受体酪氨酸蛋白激酶Src激酶家 [3] GluK4,5。其中,GluK1,2,3可形成同源功能性KA受体。GluK2基因 族包括不同的成员:Src,Fyn,Yes,Lck和Lyn 。之前的研究表明:脑 [1] 敲除的小鼠对海人藻酸诱导的神经毒性有抵抗力 。我室前期研究 缺血后,在神经系统大量表达的Src成员在缺血敏感区尤其是海马区 表明脑缺血再灌注以及癫痫可以增加GluK2-PSD95-MLK3信号模 的活性显著增强[4-7]。 块的组装继而促进MLK3-JNK3信号通路的活化,最终导致神经元 本研究中采用定点突变体试剂盒获得GluK2胞内区域的酪氨 [2] 的凋亡 。然而,关于KA受体GluK2亚基功能的具体调节机制尚不 酸位点突变体(Y587/590/844F),用电生理方法检测不同突变体受 清楚。 体功能的变化。结果表明,GluK2亚基的酪氨酸磷酸化位点主要位于 可逆磷酸化是受体功能调节的重要方式之一。越来越多的证据 胞内区。 图 1 构建的不同突变体的测序结果 2014年10月下 第20期 总第200期 209 学术研究 China Science Technology Overview 图 2 构建的不同突变体在 HEK293 细胞中的表达 图 3 磷酸化缺失型突变体显著降低 GluK2 受体介导的全细胞电流,结果均表示为平均值 ±标准误 1 实验材料和方法 5’-GTTTTT