苦瓜中具有保护及修复四氧嘧啶损伤HITT15细胞的有效成分的分离与表征.pdfVIP

有效成分的分离与表征 昊灵威柯李晶 黄晓南 刘树滔 陈航饶平凡 福州大学生物工程研究所，福建福州，3sO002 摘 要 羁的：探讨苦瓜降耱有效成分的分离纯他，观察冀在依外对四氧嘧啶破坏的胰腺 搬ordicachrantia extract，MeE)进行分离鲍化，MTT法裣攥4MCE的不弼组分对经四氙嘧啶 破坏的胰腺B细胞存治的影响。结果tSP阳离子变换鲥脂备分离妞分对玻腺8细胞的存活都 具有一定的SoD活性，在适当妁浓度范隧内，可明显战弱四氧嘧啶婶胰骧8细胞的损伤和改 善受损伤的胰腺B细胞的功能． 纲融》中记瘴琏，。酱瓜味著，性寒凉，入脾、臀经。无毒，其有除邪热，解疲乏，清心明目，益气牡阳之功．”从 l羯床特瓤、症状表现上看，糖尿病属中隰“消溺病”范畴。蒋瓜用予治疗诮渴病在中国已有久远的历史一 《滇南本荜》称其“诲六经实火，清暑、益气、止渴”；《衣经逢原》中也称苦瓜。为除热解烦，清心Ijlj髓之品”I 《榴建中草药》裁有以瓣酱瓜切碎水煎，治疗颊热口涵的验方。但瑟今为止t酱瓜中箕体的降糖成分隧不 明确。为此，我们初步探讨7苦瓜有效成分的降血糖作用及其桃制。 雏力n】。p绷胞功能异常是糖尿病发病的中心环节。有效改善寥细胞功能，对糖尿病胁治具有重要意 义。撤据赡床蜜骏的结果．酱瓜提取物能健著改善腴岛功能，部分替代以磺酰联炎为代表的刺激胰岛组 织释放魏岛索的口服药，甚至能减少部分癍人的胰岛索注射鳌，且其在有效降低血糖的同时举易发生低 脏精反应扎““．本文通过检测苦瓜抽提液中的器个成分对获豫8细胞的保护和修复效粜，对有效成分 进行了筛选，并对其性藤进行了初步表袄。 一、材料与方法 1．材料 (1)药品与试剂 (荧国Gibco公蔼)，SoD测试众(南京建成生物工程研究所)． ·199· (2)仪器 25 司)，1285型超净工作台(美围Thernlo 二、方法 1．MCE制备方法 2．苦瓜有效成分的分离纯佬 f／min。4℃骶温下离心20 用含O～1M N砸Sq的磷酸盐缓冲液阶段梯度洗脱，流速同上柱速度，洗脱过程弼核酸翟白检测仪检 测．波长280nm．收集备蜂．旋转减压浓缝，脱盐，骧千，得到8个组分的样品。供细胞实验犍羽。 3．体外促细胞增殖活憾的测定睁’ 根据各蜂豫干样晶的质量，储簿其各自在原榉中所占的比例．并接Ill：比例配制细胞实验用样品，以 {鱼溷仪灼检测渡长为590nm。细胞残存率计算公式翔下，并将其作为衡撼群品活摭的标准。 细胞残存率一(氏。。宓验级／氏*芷骷对照级)×100％ 乱苯酚一硫酸法(sl 艇样品含糖蟹。 5．己owry法㈨ 测样品蛋白古量． 6．抗氯化活性测定 按Gi8nnopliti等【l以的方法测定样品超氯化物蚊能酶(soD)牺雠． 三、结果 1．苦瓜有效成分的分离纯佬 图1是用SP阳离予交援树脂掰分离的酱瓜抽提物的色谱幽，大致可以分出8个维分，龅匿两个为 穿透峰。其余的均为洗脱蜂．体外纲服实黢诋明Pl、P3、翳这三个组分有显著的保护及修复作用．经 对各蜂的质援测定，计算出此法样品得率可达90．36％。 2．苦瓜有效成分对胰腺细胞的保护、修复作雕 ·200· ^2Ⅲ) 2．O i．5 1．O O．5 n0 0 瓤射 lIl朋 l，【Ju I，越n 豳l Sp础离予交换树脂分离M℃E苞落图 样晶30mL20聒苦瓜推握渣11．9scm×65cml巍莲s辆量一俪nI早舞缓冲涟lO．olM磷酸 缝冲被，pH罩7．oI控溯波长280衄。 率为7 59．03％，P3组分为61．07％，P6组分为66