鸡传染性囊病Vero细胞罐培疫苗的安全性和免疫效力的研究.pdfVIP

!垦查墼兰墨兰鱼曼量芏壁垒蔓土选里苎量世量堡塞基 鸡传染性囊病Vero细胞罐培疫苗的 安全性和免疫效力研究 石 岗 李永清姚炜光王宏俊 (北京市农林科学院畜牧兽医研究所．北京，lo0089) 摘要使用sPF和非免疫雏鸡分别对连续三批鸡传染性囊病vero细瞻簟培疫苗进行了安全试验和效力试 验．10倍剂量接种7日龄sPF雏鸡和16日龄非免疫雏鸡，在21天观察期中接种鸡均无任何传染性囊病的特征性 症状出现，健康存活，剖杀观察无异常．平均囊指数为o．76以上。l／5荆量免疫7日龄sPF雏鸡和16日龄非免疫雏 Fl 鸡-14天后中和抗体选371．5(GMT)以上．2l天时中和抗体为977．2以上，攻击标准I型强毒cJ80l 5代囊毒的 保护率为90％以上．结果表明该疫苗安全有效，也说明、’ro细胞罐培工艺切实可行。 f关t调鸡传染性洼氏囊病Vero细胞生物反应器疫苗安全试验效力试验二， (：—～ 传染性法氏囊病1BD是鸡和火鸡的一种急性、高度接触性传染病，给养鸡业造成严重危害。自 DV“。：。目前，对于该病的预防主要通过疫苗免疫，而病毒的增殖主要是通过鸡胚或在扁瓶和滚瓶 中培养的鸡胚成纤维细胞(cEF)进行。 为了提高病毒的产量，降低生产成本，我们利用生物反应器和微载体培养技术，通过ver。细 产工艺的改革提供了重要的基础。为了进一步为罐培疫苗生产提供依据，我们进行了免疫学试验， 现将结果报告如下： l材料和方法 1．1种毒BJ836(本所保存)经鸡胚复壮8代得到。 1．2 Vem细胞本所保存，本实验使用vero细胞为140—170代。 1．3 sPF种蛋购于中国兽药监察所和北京市实验动物中心。 chemical co．usA。 1．4徽载体cytodex3和二甲基二氯硅烷购于Sigma 1．5疫苗本组研制生产的IBD罐培试验疫苗l，2，3批。安全试验按lo倍使用剂量接种，效力 试验按l／5使用剂量免疫，每只鸡o．2mI，途径点眼、口服。 5。 1．6攻击强毒cJ801毒株，F15代囊毒，本所分离鉴定的中国标准I型强毒株o]，毒价为106 EID：。／o．2m1，攻击剂量为每只鸡1：loo倍稀释o．2ml，途径点眼、口服。 1．7 sPF雏鸡由北京市实验动物中心购得无19种病原的sPF来航鸡受精蛋，在净化的环境中 孵化出雏。健康空白对照鸡饲养在正压隔离器中，接种鸡饲养在负压隔离器中。饲料采用”c。辐射 消毒后的sPF鸡专用雏鸡饲料。饮用水为经盐酸处理的pH值调至2的酸化水。 1．8非免疫雏鸡由北京市西郊鸡场提供，在福尔马林熏蒸的洁净环境中饲养。健康空白对照鸡 与试验鸡隔离饲养，饲料采用本所提供的专用雏鸡饲料。 1．9细胞的生物反应器培养将干的Gytodex一3微载体加入经二甲基二氯硅烷硅化的容器中，用 70— 主垦查笪量匿生皇查盎堂壁垒蔓±选芏查堕过量堡塞塞 次，换上新的PBs溶液，在儿5℃下蒸汽灭菌20分，吸去上清，用培养基洗涤一次，换上新鲜培养 基，放在培养箱中平衡过夜。将处理好的微载体转移到经硅化处理的发酵罐中，接人种子细胞，在 37c培养。在培养开始后2小时内，采用间歇搅拌的方式(60rpm搅拌5分钟．静止25分种)以提高 细胞在微载体上的贴壁速率和效率，然后将搅拌速率保持在80rpm进行培养。 1．10疫苗的制备待Ver。细胞长满微载体后接八复壮种毒，培养72～96小时及取病毒毒液，经 适当稀释，加保护剂冻干，制备成疫苗。 1．11IBD中和抗体测定用微量细胞固定病毒稀释血清法，BJ83