HPLC-ELSD法测定新霉素的有关物质.docVIP

精品论文 参考文献 HPLC-ELSD法测定新霉素的有关物质 孙学志 史静杰 岳素雪 (黑龙江省大庆市食品药品检测中心 163316) 【摘要】目的 建立HPLC-ELSD法测定新霉素的有关物质的方法。方法 流动相：0.2mol?L-1三氟乙酸溶液-甲醇（98：2）；色谱柱：ODS－HYPERSIL（5mu;） 125mmtimes;4.6mm，Kromasil-100-5C18：150mmtimes;4.6mm；流速：0.4ml?min-1；雾化管温度：30 ℃；漂移管温度：70 ℃；压力：0.4MPa；进样量：20mu;L。结论 新霉胺在0.02～0.1mg?mL-1范围内线性良好，线性方程为：y= 1.513x+7.629，r=0.9996 (n = 6)。HPLC-ELSD法法能够快速、准确测定新霉素的有关物质。 【关键词】新霉素 HPLC-ELSD 有关物质 1 溶液的配制 供试品溶液的制备 精密称取硫酸新霉素样品50.17mg，加水溶解并稀释至50ml，作为供试品溶液。 对照溶液浓度的制备 精密称取新霉胺对照品适量，加水溶解依次稀释至浓度为0.04 mg?mL-1，0.05 mg?mL-1，0.06 mg?mL-1，0.07 mg?mL-1，0.08 mg?mL-1的系列对照溶液。 系统适用性溶液的制备 分别精密称取新霉胺、巴龙霉素、新霉素B和新霉素C对照品，加水制成约各含0.3mg?mL-1的溶液，摇匀，作为系统适用性试验用溶液。 2 系统适用性试验 精密量取系统适用性溶液20mu;L，在上述色谱条件下分析，各杂质峰的分离度不小于1.5，理论塔板数均大于3000，对称因子均小于1.5。见图1，2。 3 有关物质测定 精密量取标准溶液与供试品溶液各20 mu;L注入液相色谱仪，按上述方法测定并绘制标准曲线，计算新霉胺的含量为0.1%。见图3。 4 线性范围的考察 精密称取新霉胺对照品适量，分别加水制成含新霉胺0.0201、0.0301、0.0401、0.0502、0.0702、0.1003 mg?mL-1的溶液，精密量取20 mu;L注入液相色谱仪，以上述测定方法绘制随行标准曲线，得线性方程为：y= 1.513x+7.629，r=0.9996 (n = 6) 。结果表明新霉胺在0.02～0.1mg?mL-1范围内线性良好。见图4。 检出限与定量限 逐级稀释新霉胺对照品溶液，进样，记录色谱图。以噪音的3倍计，测得新霉胺的最低检出量为0.005mg，以噪音的10倍计，测得新霉胺的定量限为0.01mg。 精密度试验 分别量取浓度为0.1 mg?mL-1的新霉胺对照溶液20mu;L注入色谱仪，连续进样5针，RSD为1.0%（n=5）。结果表明，仪器的精密度良好。 重复性试验 称取硫酸新霉素样品，按照上述溶液的制备方法制备5份供试品溶液，分析测定新霉胺的含量，RSD=0.2%（n=5），结果表明，方法重复性较好。 5 结果及限度的确定 试验测得新霉胺的含量为0.04%，参考《中国药典》2010年版的规定，以含新霉胺的量不得过2.0%为本法有关物质的限度。 6 讨论 流动相流速与比例的确定 流动相的比例及流速对系统分离的影响较大，当流速或流动相中甲醇的比例增大时，新霉素B和新霉素C的峰易合并在一起，因此需严格控制。 有关物质限度的确定 参照《中国药典》2010年版新霉素杂质检查(TLC法)中新霉胺的限度规定，以含新霉胺的量不得过2.0%作为本法有关物质的限度。 7 结论 HPLC-ELSD法法能够快速、准确测定新霉素的有关物质。 图3