高效液相色谱法测定共轭亚油酸甘油酯.docVIP

高效液相色谱法测定共轭亚油酸甘油酯 刘珍珠 张辉珍 孙云飞 邱阿敏 梁小芳 王晓滨 青岛大学公共卫生学院 青岛市食品药品检验研究院 青岛澳海生物有限公司 X 关注成功！ 加关注后您将方便地在 我的关注中得到本文献的被引频次变化的通知！ 新浪微博 腾讯微博 人人网 开心网 豆瓣网 网易微博 作者简介：张辉珍163.com 收稿日期：2016-11-29 基金：青岛市民生科技计划项目 (14-2-3-74-jh) Received： 2016-11-29 共轭亚油酸甘油酯产品是以红花籽油为原料, 通过共轭化反应将其中的亚油酸转化成共轭亚油酸[1-2], 然后与甘油进行酯化反应, 生成共轭亚油酸甘油酯[3-4]。卫生部2009年第12号公告批准其作为新资源食品, 可以直接服用或者添加到脂肪、食用油和乳化脂肪制品中。 目前, 国内外对共轭亚油酸甘油酯的研究大多集中在制备、萃取和合成方面[5]。而共轭亚油酸甘油酯的检测方法一直是制约其生产工艺和产品质量的一个难题, 目前国内外没有共轭亚油酸甘油酯的检测方法标准。脂肪酸甘油酯的测定方法有薄层层析法 (TLC) [6-8]、气相色谱法 (GC) [9-11]、高温气相色谱 (HTGC) 直接进样法[9-10]和高效液相色谱法 (HPLC) [12-14]。TLC精度不高, GC无法确定脂肪酸的酯型, HTGC的灵敏度低、重现性差。用HPLC测定时, 由于脂肪酸甘油酯的紫外吸收是羧基的末端吸收, 吸收强度很弱, 紫外检测器灵敏度低[15];用示差折光检测器 (RID) 检测时, 由于RID对流动相的稳定性要求苛刻, 无法用梯度洗脱, 不适合用于极性差别大的甘油三酯、甘油二酯、甘油一酯的检测。有报道利用HPLC在233nm处测定牛奶脂肪中共轭亚油酸甘油酯的含量[16-17], 但由于没有商品化的共轭亚油酸甘油酯的标准品, 对其定量只能用归一化法, 而不同共轭亚油酸酯型的紫外吸收强度有很大差别, 归一化法定量的结果误差很大。文献[18-19]报道了采用HPLC-蒸法光散射检测器 (ELSD) 测定了单脂、二酯和三脂化合物, 但国内对共轭亚油酸甘油酯的测定未见报道。 本工作采用反相高效液相色谱梯度分离, ELSD检测, 通过优化流动相和检测器参数, 使共轭亚油酸甘油三酯、二酯和一酯得到很好的分离和测定。 1 试验部分 1.1 仪器与试剂 Agilent 1200型高效液相色谱仪, 配ELSD。 单标准储备溶液:10.00g·L, 分别称取亚油酸甘油三酯、1, 3-亚油酸甘油二酯、1, 2-亚油酸甘油二酯和1-亚油酸甘油一酯对照品各0.100 0g于10mL容量瓶中, 用正己烷-异丙醇 (9+1) 溶液溶解并定容。 混合标准溶液:移取亚油酸甘油三酯标准储备溶液3.00mL、1, 3-亚油酸甘油二酯标准储备溶液0.40 mL、1, 2-亚油酸甘油二酯标准储备溶液0.30mL、1-亚油酸甘油一酯标准储备溶液0.10mL于10 mL容量瓶中, 用正己烷-异丙醇 (9+1) 溶液稀释并定容, 此溶液中亚油酸甘油三酯、1, 3-亚油酸甘油二酯、1, 2-亚油酸甘油二酯、1-亚油酸甘油一酯的质量浓度分别为3.00, 0.40, 0.30, 0.10g·L。 亚油酸三甘酯、1, 3-亚油酸二甘酯、1, 2-亚油酸二甘酯、1-亚油酸一甘酯对照品, 纯度不小于99.0%。 正己烷、异丙醇、乙酸乙酯、甲酸均为色谱纯。 1.2 仪器工作条件 ZORBAX RX-SIL色谱柱 (4.6mm×150mm, 5μm) ;流动相A为正己烷, 流动相B为正己烷-异丙醇-乙酸乙酯-甲酸 (80+10+10+0.1) 混合液;流量1mL·min;进样量10μL。梯度洗脱程序:0~2min时, A为98%;2~8min时, A由98%降为65%;8~8.5min时, A由65%降为2%;8.5~15min时, A保持为2%;15~15.1 min时, A由2%升至98%;15.1~19 min时, A保持为98%。氮气流量1.5mL·min;漂移管温度40℃。 1.3 试验方法 称取样品0.100 0g置于100mL容量瓶中, 用正己烷-异丙醇 (9+1) 溶液溶解并定容, 充分混匀后, 在仪器工作条件下进行测定。 2 结果与讨论 2.1 色谱行为 在仪器工作条件下, 混合标准溶液和样品溶液的色谱图见图1。 图1 色谱图Fig.1 Chromatograms ??下载原图 1-亚油酸甘油三酯;2-1, 3-亚油酸甘油二酯;3-1, 2-亚油酸甘油二酯;4-1-亚油酸甘油一酯 2.2 流动相的选择 甘油酯的极性较弱, 易溶于正己烷等非极性溶剂, 在甲醇等极性溶剂中溶解度小, 所以试验选用非极性