细胞培养7.pptVIP

组织和细胞培养;第九章 细胞遗传学性状检测;碳酸复红显示X染色质法：染色液:干液:碱性复红3g,溶100ml70%乙醇中,可保存工作液:(现用现配)干液10ml;5%石碳酸水溶液90ml;冰醋酸10ml;甲醛(40%)10ml染色步骤:(1)细胞:BSS洗,染色5-10min,如用涂片应待片干后,迅速投入96%酒精固定10-15min再染色;(2)分化:96%酒精分化1min,分化时要不断摇动;(3)脱水:通过纯酒精1分钟;(4)封片:二甲苯透明2-3min，树胶封固。结果:细胞质不着色,细胞核染成紫红色,阳性Barr氏体附于细胞核膜内面呈三角形或半月形小体。;;荧光染色显示Y染色质法：荧光染液：PBS100ml；盐酸阿的平0.2g染色:Y染色质显示染色与染色体荧光显带法相同。结果:在荧光显微镜下观察,Y染色质呈特别明亮黄绿色荧光圆点,直径0.25-0.3微米,可位于核内任何位置,但以近中央时居多。;阻抑中期分裂:秋水仙素法:秋水仙素有特异抑制纺锤丝蛋白合成作用，能阻抑分裂中期活动，而对DNA作用较小，借此可截获很多中期分裂相，产生类似提高分裂指数的效应。该药有强烈的毒性，用量过大或作用时间过长，可使染色体缩短和发生异常分裂现象。低温处理:把指数生长期细胞放置到室温或冰箱中4℃4-12h，因温度降低时DNA合成受抑制，细胞不进入分裂期，当恢复用37℃温箱培