用混合培养法提高木霉A10的纤维素酶活性.PDFVIP

维普资讯 1990年第2期 两 北 大 学 学 报 N0．2 I990 用混合培养法提高木霉A10的纤维素 酶活性 张 海 颜 日祥 (西北大学生抽幕) 刘 涛 (胰西省摊生轴研宽所纤维素酶研兜基地) 摘 要 陕西省微生物研究所纤雏素酶研究基地用纤雏素酶生产 的茵缘色本霉A10 (TrichoderplgavirideA10)，具有较 高的产生 内切葡聚糖酶和外切葡聚耱酶的能 力．但其 葡萄糖苷酶的产生能力较低．用改进的培养基和接种方法混合培养 未霉和曲霉．不倪使 一葡萄糖苷酶活力比单纯培养本霉时提高 3．2倍，而且内 切和外切萄聚耱醇也同时增长 24％和 5％．滤纸酶活性增加 59％．这种混合培 养的方法为生产较高卢一葡萄糖苷酶的纤雏素酶提供了可能． 美键词：木霉；曲霉；纤雏素酶． 0 引 言 降解纤维素物质的纤维素酶主要包括内切葡聚糖酶 (EC 3，2，1，4)、外切葡聚糖 酶 (EC 3．2．1，91)和 口一葡萄糖苷酶 (EC3，2，1，2t)三个主要组分．它们的物 理化学性质不一样，作用也不尽相同．要能有效地分解纤维素，除三个主要组分必须具备 外，还要配台得比例合理，才能很好地发挥协同作用 “ ．现今国内外生产的成品纤维 素酶 ．一般都是由本霉发酵产生的，尽管本霉是前两种酶的最好来源，但其 葡萄糖营 酶产量较低 ”。”．这样，在纤维素糖化糖桨 中就会产生高浓度的纤维二糖 “，而纤维 二糖和底物之 比为 0，4时，纤维素酶的产生受抑糊达 50％ ” ． 陕西省微生物研究所纤维素酶研究基地的纤维紊酶生产菌绿色木霉 A10，其纤维素 酶系也有 F一葡萄糖苷酶皤性低的缺陷。我们尝试 了用曲霉和本霉混台培养的方法来产生 具有较高 葡萄糖苷酶活性的纤维素酶，取得了盘好效果。 本文1989年7月7日收到 ． 维普资讯 — — 74—— 丙北大学学报 (自然辩学版) 1990年 1 材料和方法 1．1 菌种 1．1．1 绿色木霉 AIO (TrichodermavirideA10)，陕西省微生物所纤维素酶研究基地纤维 素酶生产菌株．在Mandels基本培养基 上传代多次．4。C冷藏做为混台培养菌种． 1_1．2 曲霉 (AsperiglJussp．xf)，l}缶潼骊山腐质土壤分离．具有一定纤维素酶活力和较高 的 口一葡萄糖苷酶活力．保藏在马铃薯葡萄糖琼脂培养基． 1．2 培养基和培养方法 l_2．1 产酶摇瓶培养基：如表 l所示，以纤维素粉为碳源并在有 曲霉生长的培养基 中添 加一定量 的淀粉碳源． 1．2．2 培养条件：500ml三角瓶装 lOOml培养基．将 在 28oC培养 6～7天的斜 面菌种用 无菌水制成荫悬液，接人产酶摇瓶培养基．术霉接种量 5～6×lO0孢子 ／m1．24小时后 接种相同数量的曲霉．30。c于 180r／min旋转式摇床上培养 lO天． 1j 酶活力测定方法 1,3．1 酶液制备：培养液3500g离心20分钟．以上清液做为粗酶液进行测定． 1．3．2 滤纸酶活 (FPA)：0．5ml稀释酶液加 lmlpH4．8的柠檬酸缓冲液和一条 lx6cm 的新华 l号滤纸条 (50±lnig)，50。C酶解 l小时． L3．3 内切葡聚糖酶活 (CMC或 C 酶)：0．5ml稀释酶液加 Iml用上述缓冲液配制的 O．5％羧 甲基纤维素钠溶液，50。c酶解 3O分钟． 1．3．4 外切葡聚糖酶活 (CI酶)：0．5ml稀释酶液加 lml缓冲液和 50±lmg脱脂棉，50。C 酶解 24小时． 表 l 木霉、曲霉和