猪圆环病毒2型分离株全基因组序列测定与分析研究.pdfVIP

2004学术年会 囝933 猪圆环病毒2型分离株全基因组序列测定与分析 王忠田，杨汉春+ 中国农业大学农业部预防兽医学重点开放实验室，北京100094 circovurus 摘要：猪圆环病毒2型(Porcine 2，PCV2)是引起猪断奶后多系统衰竭综合征 type 等相关疾病的重要病原。为进一步了解我国不同地区PCV2分离株间的差异，本研究利用PKl5细 片段分别克隆到pGEM，T PCV2全基因组序列，与国、内外已发表的PCV2基因组序列进行比较分析。结果表明，除深圳(SZ 株)分离株的基因组全长为1768bp外，其余5株分离株的基因组全长均为1767bp，与欧、美分离 株同源性很高，由此表明在世界范围内PCV2分离株基因组序列之间差异不大。 关键词：猪圆环病毒2型；全基因组；列测定与分析 circovirus 猪圆环病毒2型(Porcine 2)是新近才发现猪的一种致病病原，它能造成猪断奶 type multisystemic 后多系统衰竭综合征(Postweaningwasting 给我国的养猪业造成相当大的经济损失。 我们实验室已经完成了3株猪PCV2的全基因组序列测定，但测序毒株仅限于我国北方地区。 为了进一步了解我国不同地区PCV2分离株间的差异，本研究从我国北京、天津、山东、广东、 株进行了全基因组序列的克隆与测序，以期为猪圆环病毒2型的分子流行病学研究提供有价值的 数据。 1材料与方法 1．1材料 1．1．1细胞及PCV2分离材料 脏、肺脏等组织作为病毒的分离材料，其中包括北京的5份，天津6份、山东3 份、广东台山3份、广东5份、深圳9份。病料保存在．80。C冻存。 1．1．2载体及■株 DNA pGEM—T Ladder，购自思 Easy载体及大肠杆菌JMl09菌株，购自Promega公司；100bp 美尔生物技术公司；DNA快速回收试剂盒，购自博大泰克生物科技公司。 1．2方法 1．2．1 PCV2病毒分离 将PCR检测为阳性的猪的组织样品，分别按1：5倍的体积加入MEM细胞培养液无菌研磨后， +杨汉春，通讯作者，博士生导师，教授。 作者简介：王忠田(1972～)，男，中国农业大学博士研究生。现工作单位：中国兽医药品监察所，主要从事兽 医新生物制品的审评工作。E-mail=tianzwsl2003@yahoo．tom．cn。 2004学术年会 934囝 细胞瓶中，每个样品接2瓶，每瓶接lml，同时设立不接组织样品的PKl5细胞作为空白对照。37 PBS洗 基，用含300mmol／LD一葡萄糖氨处理30min，弃去D．葡萄糖胺，用无菌的lOmmol／LpH7．4 涤一次，然后加入含5％血清的细胞维持液，在37。C继续孵育48h～72h后收获病毒液。取第一代 培养物，按上述方法，再接入已形成细胞单层的细胞瓶，72h后，收获病毒液。从接种病料的PKl5 细胞中提取病毒DNA。 1．2．2PCv2病毒鉴定 1．2．3PCV2的基因组C和D片段的PCR扩增 AGT (401．420 GGCTACCAC CAGAA一3’(1546．1565 nt)，引物D2：5-CAA nt)，D1、D2