猪生长激素基因多态性及与生产性能相关性研讨.pdfVIP

摘 要 本实验根据已发表的猪GH基因序列 (Larsen等，1997;和Vize等， 1987)在其5一侧‘翼区，应用Oligo软件设计了一对引物A1，预期得到聚 合酶链式反应(PolymeraseChainReacUon,PCR)产物的片段长度为811bpo 以不同品种猪 (临高猪、玉山黑猪、蓝塘猪)基因组DNA样品进行PCR 扩增，将PCR产物纯化后测序。把所得序列用DNASTAR软件进行分析， (1)所测序列与己发表的pGH基因5-侧翼区核昔酸序列进行比较 (2) 猪和不同种属动物 (牛、人、小鼠、大鼠、犬、捐玲)间GH基因5一侧 翼区序列进行比较。 根据所测序列及有关报道，设计引物A3，以临高猪、玉山黑猪、蓝 塘猪及国外猪种的基因组DNA为模板，用PCR-RFLP方法研究了从一119 至++486区段的酶切位点多态性。 用E5引物对pGH基因从++1137至++1609这一包括第5外显子在内， 区域的核昔酸序列进行了PCR-DHPLC分析。根据DHPLC分析结果，选 择不同峰形的样本再次进行PCR扩增，然后将PCR产物进行纯化、测序。 根据不同峰形结合测序结果进行基因型判定，不同基因型个体与参考家系 的部分生产性能进行相关性分析。 对pGH基因的3一非编码区序列，设计了引物A4对该区域进行 PCR-SSCP分析。 结果表明:本实验扩增到的pGH基因5一侧翼区核普酸序列在3个 品种猪中同源性介于99.3-99.8%之间，实验中测序样品所得pGH基因5 一侧翼区的核营酸与报道的序列有23处核昔酸的差异(有碱基的插入和置 换)。猪与不同种属动物的核普酸序列的同源性分别高达86%,80%,84%, 87%,83%,83%0 在这23处碱基的变异中，除与Larsen等 (1997)报道相同的以外， 本实验还新发现了1处碱基的插入 ((416位插入碱基C),3处碱基的置换 (721位G-C,722位T-C,723位C--G)e 经PCR-RFLP分析，对应于PGH基因5-侧翼区片段在不同品种猪中 都存在多态性，等位基因A,B的频率在临高猪、蓝塘猪、玉山黑猪和国 外猪种中的大小分别为0.620和0.380,0.406和0.594，0.930和0.070, I 05.75和0.425。从基因型频率来看，AA型在玉山黑猪中明显高于其它猪 平中。 对 E5引物扩增出的PCR产物的DHPLC研究发现存在多处SNPs (SingleNucleartidePolymorphisms)，包含碱基的缺失和置换，它们为 +1165位G碱基的缺失，+1218位T-C碱基的置换，+1277位C--T碱 基的置换,，+1579位T-C的置换，发生变异的位置分别在第4内含子区和 3一非编码区，这些变异没有引起氨基酸的改变。其中++1579位碱基置换可 以判定AA,BB,AB三种基因型。在参考家系资源群体各代中，A,B 基因频率分别为:亲代0.490和0.510,F1代0.50和0.50,FZ代0.426和0.5740 与生产性能进行相关性分析后得到不同基因型与生产性能之间存在着一 定的相关，不同基因型个体与参考家系中的测定重、体长、体高、胸宽、 胸围、腿臀围、月同体A,B,C点膘厚、平均膘厚等生产性能之间没有显 著差异;但 BB基因型个体的测定重、体长、体高、胸宽、胸围都高于 AA和AB基因型个体;BB基因型个体的腿臀围、月同体A,B,C点膘厚 及平均膘厚则均低于AA和AB基因型个体;BB基因型个体的断奶后日 增重显著高于AB基因型个体 (P0.05)，也高于AA基因型个体，但差 异未达到显著水平;BB基因型个体达100Kg日龄显著低于AB基因型个 体 (P0.05)，比AA基因型个体达l04Kg日龄也低，但它们之间的差异 不显著。 对3’一端非编码区进行SSCP分析后，发现该区域没有发生变异。 关键词:猪，生长激素基因，多态性，生产性能，相关性 常用缩写词及英汉对照 by Basepair 碱基对 dNTP DeoxyadenosineTriphosphate 脱氧核糖核普三磷酸 EB EthidiumBromide