圈卷产色链霉菌多效调控基因——samR分子机制的研讨.pdfVIP

摘 要 圈卷产色链霉菌 (Streptomycesansochromogenes)是分离自我国东北土壤的 一株尼可霉素产生菌，具有类似于丝状真菌的复杂的发育分化周期。saMR是本实验 室首次从链霉菌中克隆到的icjR类转录调控基因，本论文利用EMSA确定了saMR 调控的三个靶基因及其识别的靶位序列，通过高分辨 STmapping确定了各自的转 录起始位点，并通过基因阻断对 samR及其靶基因hpdAl的功能进行了研究。EMSA 和RNA转录水平研究揭示了San‘的转录受saoR的调控。 saMR基因 (GenBank登录号为AF369921)生物学功能研究表明:SaMR阻断突 变株的形态分化相对于野生型约延迟2天左右;同时生物活性检测和HPLC分析显 示，samR突变株中尼可霉素两大主要组分一X组分和Z组分的合成均明显减少。单 拷贝互补实验表明，突变株形态分化及尼可霉素的合成能力都恢复到野生型。基因 剂量试验揭示，在圈卷产色链霉菌野生型中增加二mR基因1个拷贝数和多个拷贝 数，其形态分化较野生型略有加快，尼口1霉素的产量也稍有提高;但增加多拷贝数 与增加单拷贝的转化株并无明显差异;这暗示着、mR基因可能存在自调控机制。 凝胶阻滞实验发现，SamR可与 a‘mR自身启动子区域、靶基因如dAl以及尼可 霉素合成的全局调控基因、n‘的调控区域进行特异性结合;DNase工footprinting 进一步证实，在￡3mR基因的上游及翻译起始位点附近分别有两个SamR蛋白的识别 位点，而hpdAI和 、n‘的调控区中各有一个SamR蛋白的识别位点，这一结果与 EMSA结果相印证。高分辨的S1mapping揭示saMR具有两个转录起始位点，分别是 起始密码子 (GTG)上游48-bp处的C和59-bp处的C;hpdAl亦有两个转录起始位 点，分别是位于起始密码子 (ATG)上游35-bp处的T和46-bp处的T;San‘具有 三个转录起始位点，分别是起始密码子 (ATG)上游34-bp处的G.35-bp处的c和 36--bp处的C高分辨Slmapping结果证明，samR特异性调控San‘的转录水平， 是该基因转录的正向调控基因。 hpdA1基因编码产物与4-经基一苯丙酮酸双加氧酶有96%的相似性，为研究该基 因的发育分化调控中的作用，构建了用于双交换的重组质粒，并得到了相应的转化 子。功能研究正在进行之中。 samR与天蓝色链霉菌中scrx基因具有高达92%的相似性，对两者的靶基因特 异性进行了研究。发现SamR可与scrx及其靶基因hpdA2,hpdB2的调控区结合。 本论文首次揭示了圈卷产色链霉菌中iclR类似基因samR在发育分化及抗生素 合成中的调控功能及分子机制;首次发现了 IclR家族转录调控因子在调节分支代 谢途径中关键酶基因表达的同时，调控途径特异的转录调控因子。上述研究结果为 链霉菌发育分化调控网络的阐明提供了新的理论依据，开辟了其发育分化调控研究 的新视点。 关键词:圈卷产色链霉菌 转录调控 EMSA DNase1footprintingS1mapping MolecularMechanism ofthePleiotropicRegulatoryGene 一“mRinStreptomycesansochromogenes Abstract YanlingYang (Genetics) DirectedbyDr.HaihuaYang Streptomycesansochromogenes,isolatedfromthesoilinnortheasternChina,canproduce nikkomycinsthatexhibitsignificantactivityagainstphytopathogenicfungiandhuman pathogens.S.ansochromogeneshasatypicalandcomplicateddevelopmentalprocess resemblingthatoffilamentousfungi.samRwasaOR-likegeneclonedfromS. ansochromogenesbyDr.GangLiuinthepreviouswork.Myw