改良后的ICA免疫层析法检测沙眼衣原体的抗原的方法学研究.docVIP

精品论文 参考文献 改良后的ICA免疫层析法检测沙眼衣原体的抗原的方法学研究 石小艳 陈永红 禹倩 　　（东莞市高埗医院检验科 523270） 　　【摘要】目的 通过不同的检测方法，对沙眼衣原体的抗原进行检测，比较这几种检测方式的灵敏度，建立一种简便、快速有效的衣原体检测方法。方法 选取我院158例泌尿生殖道感染患者，和100例非泌尿生殖道感染的门诊患者，258例患者均采取Giemsa染色细胞学检测法，PCR反应法以及改良前后的ICA免疫层析法进行检测，并以PCR法检测结果作为对照。结果158例泌尿生殖道感染患者，和100例非泌尿生殖道感染的门诊患者的Giemsa染色法的阳性率分别为9.5%和2%，PCR反应法的阳性率分别为25.9%和12%，改良前ICA免疫层析法的阳性率分别为21.5%和5%，改良后ICA免疫层析法的阳性率分别为24%和10%。结论 虽然PCR反应法的灵敏度最优，但是其需要配备高端仪器与专业人员，只适合在大型医疗机构推广；而改良后的ICA免疫层析法操作简便，灵敏度仅次于PCR反应法，适合在基层医疗机构广泛使用。 　　【关键词】ICA免疫层析法 沙眼衣原体 聚合酶链反应 　　【中图分类号】R457.2 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2014）04-0107-02 　　沙眼衣原体是一组寄生在女性宫颈柱状上皮细胞或者男性尿道上皮细胞的病原体，在性传播疾病中所在的比例以10％逐年增加。沙眼衣原体感染的检测方法有很多，本文对在我院治疗的258例患者的检测情况报告如下。 　　1 资料与方法 　　1.1临床资料 　　选取我院2011年2月到2012年2月258例作为研究的对象，其中158例泌尿生殖道感染患者，其中男77例，女81例，年龄在19～49岁之间。而另外100例非泌尿生殖道感染的门诊病人，其中有男性42例，女性58例，年龄在20～57岁之间。这些研究对象在接受检测之前，需要确保未使用抗生素。 　　1.2方法 　　1.2.1ICA免疫层析法 　　（1）改良前ICA免疫层析法 　　标本采集：女性受检对象需要采集其宫颈口外的分泌物。男性受检对象需要采集其尿道口分泌物 [1]。检测时，严格按照相关操作规程与试剂操作说明书进行操作。ICA免疫层析法所需的ICA试剂均由浙江艾康生物技术有限公司生产。 　　操作方法：将0.6毫升试剂缓缓加入待测标本当中，并进行加热，时间为10分钟至12分钟之间。加热完毕后，待标本冷却至室温，将标本的过滤液滴至测试卡，15分钟之后，观察检测结果。 　　判定标准： 　　阳性：测试区与对照区均会出现一条红色条状物； 　　阴性：仅仅在对照区出现一条红色条状物； 　　无效：测试区与对照区均无任何反应，需要重新检测。 　　（2）改良后ICA免疫层析法 　　ICA免疫层析法是通过检测单克隆抗体来实现的。在检测之前，必须通过高温处理，将抗原分离出来。而沙眼衣原体抗原存在特异性，只有当温度处于78摄氏度至82摄氏度之间，抗原才能完全成功被分离出来。一旦温度控制不当，就会导致分离出的抗原又重新结合，从而导致检测的灵敏度降低。 　　因此，改良后的ICA免疫层析法采用了电子恒温水温箱来控制温度，这样可以更加精准有效地将温度控制在78摄氏度至82摄氏度之间的最佳范围，阻止分离出来的衣原体抗原逆结合，以提高检测的灵敏度。另外，检测标本的采集方式也会对检测结果造成影响。男性受检对象不仅仅要采集其尿道分泌物作为检测标本，还应该采集其尿液，并将尿道分泌物与尿液混合后，再进行检测。标本检测的操作方法，同改良前的ICA免疫层析法一致，只是通过电子恒温水温箱来控制温度，避免误差所产生的不良后果。阳性判定标准同上。 　　1.2.2Giemsa染色法 　　Giemsa染色法检测，对于男性患者需要采集其尿道的细胞与分泌物，对于女性患者需要采集宫颈口的细胞与分泌物[2]。检测过程中，需要严格按照国家相关临床操作规程进行操作。阳性：出现染色细胞；阴性：无染色细胞出现。 Giemsa染色法中所需要的Giemsa染色液必须按照《全国临床检验操作规程》第三版进行自配并使用。 　　1.2.3PCR反应法 　　PCR反应法为实时荧光定量聚合酶链反应法，与Giemsa染色法检测所需标本采集部位一致。由于PCR反应法是国际公认的诊断方法之一，适用于检测多种临床标本，并且对于筛选无症状人群具有非常大的优势[3]。因此，选取该方法的检测结果作为对照，以评价其他两种检测法的灵敏度。另外，PCR检测法所用到的FQ-PCR试剂、标准液以及阴阳性质控物均由上海复星医学科技发展有限公司生产。 　　1.3统计学分析 　　使用S