联合转染mdr1和mcl1基因短发夹RNA干扰表达质粒逆转K562A02细胞耐药的实验研究.pdfVIP

·456· ·论著· 联合转染mdrl和mcll基因短发夹RNA 干扰表达质粒逆转K562／A02细胞耐药 的实验研究 余海青纪春岩马道新臧绍蕾 【摘要】 目的构建针对mdrl和mcll基因的短发夹RNA(shRNA)于扰表达质粒，并探讨联合 转染对l(562／A02细胞耐药的逆转作用。方法根据mdrl和mcll基因表达序列设计有效的RNA干 扰片段，分别将其构建入质粒表达空载体中，以获得两种基因特异性shRNA干扰表达质粒；然后在脂 质体介导下分别和联合转染硒62／A02细胞，用G418和(或)HygmB筛选出稳定表达的细胞克隆。用 RT．PcR分析mdrl和mcllmRNA的表达；MTT法检测阿霉素对K562／A02细胞的半数抑制浓度 (，c，。)；流式细胞术测定细胞P一糖蛋白表达水平以及细胞凋亡率。结果成功构建两个基因的shRNA 干扰表达质粒。mdrl、mcllshRNA干扰表达质粒单独和联合转染硒62／A02细胞可有效封闭相应基 因表达，联合转染组mdrl基因和mcll基因的mRNA相对表达水平分别是未转染细胞的52％，44％。 mdrl、mcllshRNA干扰表达质粒单独和联合转染后K562／A02细胞耐药逆转率分别为63．8％， 71．1％，83．1％，转染两种质粒组对K562／A02细胞耐药逆转率最高，P糖蛋白相对表达量由未转染组 的19．70±1．15降至6．40±0．92(P0．01)，阿霉素诱导的细胞凋亡率由(1．53±0．42)％提高至 (7．77±0．42)％(P0．01)。联合转染两种质粒组和单独转染组比较，细胞对阿霉素敏感性和阿霉 素诱导的细胞凋亡率差异亦有统计学意义(P0．05)。结论转染mdrl或mcll基因的shRNA干扰 表达质粒可有效抑制相应基因表达，皆不同程度逆转K562／A02细胞对阿霉素的耐药性；联合转染两 种质粒可显著增加逆转耐药的效果。mcll基因可能与I562／A02耐药相关。 【关键词】 RNA干扰；基因，mdrl；基因，mcll；细胞株，飚62／A02；抗药性，多药 Reversalof resistanceinK562／A02ceUstwoshort mdrl multi—d邝g by hairpiIIRNAs(shRNA)of 锄dmdl genesⅢmⅫ增，刀现舯妒n，删D00-省流，尉ⅣGls^盼兢Dep口村榭m矿虢moto如gy，眇 2如0J2，肌ino 乜舶s础oZo厂肌n砌增踟讹瑙毋，五Mn correspo，趔增口u￡^or：Ⅳ劬Ⅱn一粥n，Em捌：．商c危u郴n@s也．e也．cn Toconstructtworecombinantofmdrlandmcll toin— 【Abstr躯t】objective plasmids shRNA，and inK562 resistant Meth- vestigatetheirreversaleⅡIectondmgresistance adriamvcinceⅡlines(K562／A02)． o‘ls Two ofmdrlandmcll were tothat oligonucleotides gene designedreferTingofknBank，double-stI氇n— dedDNAwasderived clonedinto vector hvorestrictedendoen— throughannealing，andpRNATdigestedby cellsweretransfectedwiththerecombinant mdrlmRNA andits zvmes．K562／A02 plasmids．The expression RT—PCRandnow The