慢病毒介导的大鼠白细胞介素-1Ⅰ型受体基因RNA干扰对体外软骨细胞的作用.pdfVIP

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2018-04-07 发布于北京
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慢病毒介导的大鼠白细胞介素-1Ⅰ型受体基因RNA干扰对体外软骨细胞的作用.pdf

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立生塞墅筮登苤查垫i!生!旦筮；2鲞筮!塑鱼i!』巨业!!强：』垡z垫!：：!型：；!：丛：! ·1229· ·骨科基Zi,ql研究· 慢病毒介导的大鼠白细胞介素一1I型受体基因RNA干扰对体外软骨细胞的作用杨丰建俞永林林伟龙黄东辉陈聪蔡晓唏【摘要】目的构建大鼠白细胞介素．1(IL．1)I型受体基冈RNA十扰(RNAi)慢病毒表达载 I型受体(IL-1RI)基阕的RNAi 体，并观察其对体外大鼠软骨细胞的作用。方法筛选确定1L-1 有效靶序列，使用293T细胞包装产生慢病毒。收集293T细胞t：清液并浓缩，得到滴度为l×10 TU／ml的病毒。使用携带有效干扰片段的慢病毒分别以转染倍数(MOI)值20和50感染体外培养 blot法测定软骨细胞中IL-lRI以及基质金属蛋白酶·1(MMP-1)的表达。结果的软骨细胞，Western I以及适合感染软骨细胞的MOI为50，感染率70％。经过RNAi后，体外培养的软骨细胞IL一1R I基因干扰能够显著降低体外培养的 MMP．1蛋白表达显著降低。结论慢病毒介导的大鼠IL—lR 软骨细胞中IL一1RI的表达，并进一步降低下游蛋自MMP—l的表达。【关键词】慢病毒；白细胞介素一l； RNA干扰；软骨细胞；基质金属蛋门酶-1 oflentivirus-mediatedRNAinterferenceoninterleukin·1 I in effect receptortypegene Suppressive rat invitro YANG chondrocytes b_ng-jian‘，YUYong—lin，uhWet—long，HUANGDong—hui，t：HEN 200040， of Hospital。FudanUniversity，Shanghai Cong．CAIXiao．xi．‘DepartmentOthopaedics，Huadong China author：YU CorrespondingYong—z梳．Email：yuyonglin@fudan．edu．cn To lentiviralvectors ratinterleukin一1 construct typel(IL一【Abstract】Objective targeting receptor tostudvitseffectson invitro．MethodsEflee— 1 RNAinterference(RNAi)and RI)geneby chondrocytes IL．1 was anddeterminedand239Tcellswereweretrans- tive ofsiRNA RI sequence targetinggene designed I)NA lentivirus theeffective feetedwith vector theinserted pGCI．一(订P containing sequence．Thecontaining