棉花细胞工程及新种质创造研究.pdfVIP

66 中国棉花学会2004年年会论文汇编 棉花细胞工程及新种质创造 Cell New and Gern口lplasm inCoUon Engineering Development 张献龙。孙玉强。吴家和．金双侠。聂以春，郭小平 (华中农业大学作物遗传改良国家重点实验室，武汉430070) 摘要：针对我国棉花育种资源缺乏问题，从细胞工程角度开展了棉花资源创新工作，从多个方面介绍了 华中农业大学在棉花细胞工程方面的研究工作，包括在国际上首次从野生棉获得再生植株，首次获得栽 培棉种和野生棉种之间的体细胞杂种植株，对杂种进行了广泛的验证和评价。 关键词：棉花；细胞工程；细胞融合；体细胞杂种；新种质创造 种质资源是育种的物质基础，棉花是我国社会发展和经济建设的重要作物，但资源贫乏是制约棉花 新品种选育突破性发展的重要因素，在资源创新的理论和方法上创新关系到棉花育种事业的发展。生 物技术的发展为植物育种提供了新途径和新思路，服务于育种最直接的生物技术是细胞工程，可以利用 细胞变异、转基因诱变、细胞融合等技术创造新种质，直接和间接地服务于棉花育种。本文主要针对华 中农业大学近年来的主要研究工作进展阐述棉花细胞工程及新种质创造方面的研究工作。 1 棉花细胞培养与再生技术体系的优化 筛选一个合适的激素组合是诱导体细胞胚胎发生的关键。在众多的测试组合中，发现IBA无论在 1．0 0．5 织的胚胎分化率提高到89．5％，其最优配比为IBAmg·L1+KT0．5mg‘L“和IBAmg‘L“+ KT0．3 mg-L一。 在诱导愈伤组织时，进行盐离子胁迫处理可以促进体细胞胚胎发生。培养基中补加120mg‘L。 mg 硫酸镁，珂字201愈伤组织的诱导量和增殖量都相应地增加到最大值；而在增殖培养基中增加42 ·一硫酸亚铁，会使愈伤组织的生长受到抑制，但是改良了愈伤组织的质量，加速向胚性愈伤组织转 化。在分化培养基中补加1．0 mg·L‘1的氯化 g·L’1的氯化钾可以促进愈伤组织分化成胚；补加200 钙也可以促使愈伤组织向胚分化，但是会抑制胚性愈伤组织的生长。在诱导原始愈伤组织时，诱导 培养基中NH。NO，的水平对愈伤组织以后能否发生体细胞胚胎分化至关重要；在分化培养基中撤去 NH。NO，，并增加KNO，，可以明显提高愈伤组织胚分化率，使珂字201的愈伤组织胚分化率达到80％ 以上。 在上述基础上建立了棉花体细胞胚胎发生的植株再生体系，利用该体系使许多再生困难的品种成 8、Ekang9、Ekang 功获得体细胞胚胎发生和植株再生，这些品种主要有Ekang3、Ekang4、Ekang6、Ekang 10、Emian 1、B1和B11。并比较了该体系的再生效率，它比现在大多数实验室通用的两种棉花 22、Ejing 化率为81．7％，而其它两个体系的胚胎分化率为21．8％和43．5％。 棉花细胞分化之前存在明显的PCD过程，可能与细胞分化有关。对棉花组培中不同时期的愈伤组 d左右和愈伤组织第一次继代到分化 织DNA进行琼脂糖电泳，观察到仅在第一次愈伤组织继代后10 bp左右的片断或其整数倍片断大小的DNA带， 培养基中培养10d左右，愈伤组织的DNA产生了180 呈DNA梯(DNA 现愈伤组织大规模的褐化死亡。显微镜观察到第一次PCD发生高峰的愈伤组织存在许多管状、内含物 少的细胞，这些细胞分布在愈伤组织的边缘和内部；第二次PCD发生高峰观察到体细胞胚胎分化、PCD 细胞的木栓化和水渍化。对体细胞胚胎分化时期