实时荧光定量PCR筛选有效RNA干扰方法的建立.pdfVIP

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2018-04-07 发布于北京
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实时荧光定量PCR筛选有效RNA干扰方法的建立.pdf

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Med 2010，V01．7，No．10 检验医学与临床2010年5月第7卷第10期LabClin，May ·903· 豳实时荧光定量PCR筛选有效RNA干扰方法的建立刘建军，张茂雷，朱芳芳(山东省菏泽市牡丹区中心医院 274014) 【摘要】目的建立一种利用实时荧光定量聚合酶链反应(RT—QPCR)技术检测RNA干扰(RNAi)效果的方法，为筛选有效的RNAi提供一种科学，可靠的实验方法。方法选用质粒载体pavu6．1-27构建的3个携带 NCOA-3基因干扰序列和一个阴性对照序列的重组质粒，转染ECAl09细胞。培养48h，在荧光显微镜下观察荧光量，从而计算各组的干扰效率。结果相对于A组未转染细胞。各组mRNA表达量分别为B组101．3％，C组能进行RNAi效果的筛选，其自动化程度和检测灵敏度高；本研究建立的利用RT-QPCR筛选有效RNAi片段的方法可以为肿瘤研究、药物筛选、功能基因组研究等各个领域提供可靠的实验基础。【关键词】实时荧光定量聚合酶链反应； RNA干扰；NCOA-3基因；转染效率；干扰效率中图分类号：R446 文献标志码：A 文章编号：1672—9455(2010)10—0903—03 in interferencetime Establishmentofamethod theeffectofRAN on chain detecting flurogenicquantitativepolymerase reaction in Hospital LIUJian-jtin，ZHANGMao-lei，ZHUFang—fang．MudanCentralHezeCity，Heze，274014， Shandong，China a the [Abstractl ToestablishmethodtodetecteffectofRNAinteferenceontime Objective flurogenicquanti- tative chain offerascientificandreliablemethodfor outeffective reaction(RT·-QPCR)and se—— polymerase screening for RNAinterference．MethodsThreerecombinantconstructed differ— quencespecifieal plasmids pavu6．卜27taking a entinteferenceforNCOA-3wereselected．Andcontrol wasalsoinsertedinto sequences negative sequence plasmid vector intoECAl09 weretransfected cells numbersoffluorescenceeell