第九章 微生物生物转化.ppt

第九章 甾类激素的微生物转化;第一节 概述;早期甾类激素药物的生产主要靠化学合成。 脱氧胆酸--醋酸可的松 甾体激素类药物生产新的途径——微生物转化。 少根根霉及黑根霉能使黄体酮转化成11α-羟基黄体酮，收率达85％。;细菌、酵母、霉菌和放线菌的某些种类都可能使甾类化合物的一定部位发生有价值的转化反应，微生物转化已成为甾体工业中不可缺少的部分，在生产中常采用化学合成与微生物转化相结合的办法。;微生物转化在生产工艺上有如下特点: ① 可减少化学合成步骤，简化生产流程，缩短生产路线。 ② 能提高产物的收率和产品质量，降低成本。 ③ 可进行化学法难以实现的反应。 ④ 微生物转化避免和减少了强酸、强碱或化学有毒物质，改善了生产环境。; 第二节 微生物转化反应类型 ; 1．C9α羟化;2．C11α羟化;; C11α羟化是微生物转化的特有反应，人体内的??也不能将甾体C11α羟化。 在C11α羟化菌株中，以黑根霉为最好 利用微生物转化的方法实现、 C11β、 C16α 、C17α和C19α位的羟化反应，这些也是制药工业中很有价值的反应。 ; 二、环氧化反应 用微生物转化法在甾体母核上引入环氧基团的反应。 ;三、脱氢反应 ;化学法脱C1、C2氢是采用二氧化硒法，由于硒在生产中难以除尽会使产品中带有少量对人体有害的物质，所以采用微生物转化脱氢是甾体抗炎激素药物合成中不可缺少的一步。 微生物对甾体羟化与脱氢能力是相反的，细菌的脱氢能力比真菌大，特别以棒状杆菌和分枝杆菌活力最大。球形芽孢杆菌、诺卡菌对可的松和皮质醇也有较高的脱氢活力。 ; 四、还原反应 微生物催化的还原反应有各种类型：有的是甾类化合物上的醛或酮基被还原成伯醇或仲醇基；也有的是甾类核的A环或B环中的双键被加氢还原成饱和键等。 ; 五、水解反应 微生物进行的水解反应包括脱酰化反应、环氧化物的水解反应等。 ;第三节 甾类激素的生产工艺过程 ;一般先进行菌的培养，在菌生长过程中累积甾体转化所需要的酶，然后利用这些酶来改造分子的某一部位。 为了获得较多的酶，首先需保证菌体的充分生长，但微生物的生长与酶的生产条件不是完全一致的。 ; 一、甾类激素生产的原料 早期合成甾类激素的起始原料大多来自动物的胆甾醇、胆酸等。因这些原料的来源少、含量低、成本高，不能满足生产的需要。因而促使从植物中寻找起始原料并获得成功。 已经大量投产的甾类原料：胆固醇、胆酸、薯蓣皂苷配基（穿龙薯蓣和盾叶薯蓣）、豆甾醇、澳洲茄碱等。;二、甾类激素的微生物转化生产流程 ;大多数甾体化合物难溶于水，通常是先把底物溶于有机溶剂，如丙酮、乙醇、甲醇，浓度在 2％时对微生物无毒性。或用表面活性剂(如吐温80)来提高基质溶解度。 甾体氧化需要较大的通气量，一般1：0.8(vvm)。 甾体加入的速度随菌种转化能力和基质的性质而定，一般浓度约200～800mg／L，采用基质的定期加入和连续加入的办法来解决基质或产物的毒性问题。 ;转化时间随菌种而异，一般范围在12～72h。 转化后的产物大多不溶于水，所以采用溶剂萃取法进行提取。 如果产物分泌在发酵液中，则发酵滤液采用离子交换树脂吸附法吸附甾体化合物，洗脱后，减压浓缩进行结晶。;二、甾体微生物转化方式 进行微生物转化反应可以利用不同形式的微生物细胞，如菌体培养物、静止细胞悬液、孢子悬液、混合培养物、固定化细胞或固定化酶等。 静态菌体悬液 优点：能自由地改变反应液中的基质和菌体量的比例，与生长培养法相比一般能缩短反应时间，在转化生长物中杂质较少，分离提纯比较容易等。 ;混合培养 混合培养进行反应是将具有1，2脱氢能力和11β羟化能力的微生物并用进行转化反应。可省略抽提操作。 ;第四节 氢化可的松的制备;氢化可的松为皮质激素类药物，具有影响糖代谢、抗炎、抗毒、抗休克及抗过敏等作用。主要用于肾上腺皮质功能不足和自体免疫性疾病；应用于某些感染的综合治疗。 消化性溃疡病、骨质疏松症、精神病、重症高血压患者忌用，充血性心力衰竭、糖尿病、急性感染病慎用。由于氢化可的松疗效确切，为重要的甾体激素类药物之一，在国内生产的激素类药物中产量最大。; 1．反应原理; 2．工艺过程 ;将玉米浆、酵母膏、硫酸铵、葡萄糖及水投入发酵罐中搅拌，用NaOH调整物料pH值到5.7～6.3，加入O.03％豆油，灭菌温度120℃ ，通入无菌空气，降温至27～28℃ ，接入犁头霉孢子悬浮液，通气搅拌发酵28～32h。 用NaOH调pH值到5.5～6.0，投入发酵液体积0.15％的莱氏化合物S，氧化48h后，取样做比色试验检查反应终点。 ;到达终点后滤除菌丝，滤液用树脂吸附，然后用乙醇洗脱，洗脱液经减压浓缩至适量，冷却到0～10 ℃，过滤、干燥得到粗品，收率46％左右。 以上所得粗品中主