舒郁胶囊及柴胡提取物含药血清对大鼠海马神经元GABABR2介导的ERK通路和ACcAMPCREB通路的影响Effect of Shuyu capsule and Radix Bupleuri extract-containing serum on GABABR2-mediated ERK pathway and ACcAMPCREB pathway in rat hippocampal neurons.pdfVIP

提 要 目的 ：观 察郁情绪大 鼠模 型血清对海 马神经元 G A BA bR 2 蛋 白表达和 E R K 通 路 中 E R K 1/2 蛋 白的磷酸化水平 的影 响 ，并研 究舒郁胶囊和柴 胡提取物对其变 化 的纠正作用 ，在离体水平上初步探 讨抑郁情绪发病 的中枢机制 ，并研 究 中药舒 郁胶囊对抑郁情绪 的干预作用 ；同时利用 G A BA bR 2 特异性激动剂将该受体激 活 ，检测含 药血清对激活 的下游效应器水平 的变化 的影 响，探讨 中药舒郁胶囊对 G A BA bR 2 下游信 号转 导 的作用机 制 。 方法 ：1、本研 究采用慢性温和应激造模法制备抑郁情绪大 鼠模 型 ，调肝 方 药舒郁胶囊和 柴 胡提取物进 行药物 干 预 ，通 过糖 水 、旷场 实验 结合宏观 行 为药 理 学观察对证候模 型进行评价 ，认定模 型复制成功后 ，制备各组大 鼠血清 ，采用血 清药理学方法 ，通过抑郁情绪大 鼠模 型各组血清来干预大 鼠离体海 马神经元 ，应 用 蛋 白免疫 印迹技术 ，分别检测海 马神经元 G A BA bR 2 蛋 白表达和 E R K 通 路 中 E R K 1/2 蛋 白的磷酸化水平 。 2 、结合血清药理学和细胞培养技术 ，利用激动剂激活 G A BA bR2 信 号通路 ， 观 察离体海 马神经元细胞 内G A BA bR 2 介 导 E R K 通 路 中 E R K 1/2 蛋 白和 C R E B 蛋 白的磷酸化 水平和 A C /cA M P/C R E B 通路 中 cA M P 的含量水平 的变化 。 结果 ：1、与正常组大 鼠相 比，模型组旷场实验总分显著减少 P（0〈.01)，糖 水实验 的糖水摄入显著 降低 P（0〈.0 1) ; 而造模 并给予舒郁胶囊 、柴 胡皂苷提 取 物 和氟西汀 的大 鼠较模型组大 鼠旷场 实验 总分显著增加 P（0〈.0 1 或 P 0〈. 05 或 P 0〈. 01)，糖水实验的糖水摄入显著增加 P（0〈.0 1 或 P 0〈.05 或 P 0〈.0 1)。蛋 白免 疫 印迹 结 果 显 示 ，与正 常 组 血 清 干 预 的海 马神 经 元 相 比，模 型 组 海 马神 经 元 G A BA bR 2 蛋 白表达和 P-ER K 1/2 水平显著升高 P（0〈.01)。造模并给予舒郁胶囊 血清组 、柴 胡皂苷血清组和氟西汀血清组干预 的大 鼠海 马神经元 G A BA bR 2 蛋 白 表达和 P-E R K 1/2 水平较模型血清组显著 降低 P（0〈.05)。 2 、大 鼠海 马神经元 G A BA bR 2 被特 异性激动剂激活后 ，与空 白组海 马神 经 元相 比，激 动 剂 组海 马神经元 cA M P 的含量 水平 、P-E R K 1/2 和 P-C R E B 水 平 均 显著增高 (P 0〈. 0 1) 。与激动剂组相 比，给予舒郁胶囊组和拮抗剂组干预 的大 鼠 海 马神经元 cA M P 的含量显著 降低 P（0〈.0 1)，柴 胡组较激动剂组则无显著性 差 异 P（0.05)，但柴 胡组 CA M P 的含量有 明显下调 的趋势 ；给予 G A BA bR 2 拮抗 剂干 预 的大 鼠海 马神经 元 P-ERK 1/2 水平 较激动剂 组显著 降低 P（ 0〈.0 1), 舒郁组 无显著 降低 ，但是有 降低趋 势 ，柴 胡组无 降低趋势 ；给予舒郁胶 囊血清组和拮抗 剂 组干 预 的大 鼠海 马神 经元 P-CREB 水平 显著 降低 P（0〈.05 ，P 0〈.0 1)，柴 胡组较 激 动 剂 组 则无显著性 差 异 。 结论 ：1、釆用慢性温和应激 法可 以成 功制备抑郁情 绪大 鼠模 型 ，糖 水偏好 实验 、旷场 试验 结合宏 观 行 为 药 理 学可有 效评 价模 型 。 2 、抑郁情绪大 鼠模 型各组血清来干预大 鼠离体海 马神经元后 ，大 鼠海 马神 经元 G A B A bR 2 蛋 白表 达 升 高 ，表 明 G A B A bR 2 与抑郁情 绪 关 系密切 ，可 能是抑 郁情绪 发病