舒郁胶囊对大鼠海马神经元5-HT3受体表达及其介导的Ca2+-CaM通路的作用Effect of Shu Yu Capsule on the expression of 5-HT3 receptor in rat hippocampal neurons and its mediated Ca2 -CaM pathway.pdfVIP

舒郁胶 囊对抑 郁情 绪模 型 大 鼠海 马神 经元 中 5-H T 3 受体 表达 及其介导 的 C a2+-C aM 通路 的作用 提 要 目的：观察舒郁胶囊及其君药柴胡 的抗抑郁作用 ，通过离体实验研宄，结合血清 药理学实验方法 ，以大 鼠海 马神经元 中 5-HT3 受体作为研宄对 象 ，初步探索抑郁情绪 发病 的微观作用机制 ，并试 图明确调肝方药舒郁胶囊 的相应作 用靶 点 。 方法 ：运用无血清培养技术进行大 鼠海马神经元原代培养 ；制备各组大 鼠血清 ， 在 中药 血清药理 学 的指 导 下 ，实验共分为三个部分 ： 1.采用孤养 结合慢性温和刺激 复制抑郁情绪大 鼠模 型 ，以调肝方药舒郁胶囊及其 君药柴 胡 的提取物进行药物干预 ，氟西汀作为 阳性药物对照 ，制备各组大 鼠血清 ，分 别加入 体外培养新生大 鼠海 马神经元 的培养基 中孵 育 24h ，采用 蛋 白印迹技术 (W estern b lot) 和细 胞免疫 焚光技术 （Immunofluorescence ，IF ) 分别检 测神经 元 中 5-HT3A 受体和 5-HT 3B 受体 蛋 白水平 的表达 。 2.采用与实验一相 同的方法制备血清 ，在此基础上运用荧光探针 fluo-3/AM 标记 细胞 内游离钙离子 ，利用激光共聚焦显微镜观察海马神经元细胞 内Ca2+ 荧光强度 的 变化及 各组海 马神经 元 中 CaM 受体 蛋 白水平表达量 的变化 ，进 一步研 宄舒郁胶 囊及其 君药柴 胡对 5-HT3R-Ca2+-CaM 通 路 的影 响 。 3.制备一 定浓度 的舒郁胶 囊和柴 胡含 药血清 ，利 用激 动剂 激 活 5-HT3 受体信 号通 路 ，将 5-HT3 受体信 号通 路 中的 Ca2+-CaM 体 系单独作为研 宄对 象 ，观察海 马神经元细 胞 内Ca2+ 荧光强度和 CaM 受体 蛋 白水平表达量 的变化 ，探索舒郁胶囊及其君药柴 胡 对 5-HT3 受体介 导 的 Ca2+-CaM 受体 蛋 白信 号通路 的作用 。 结果 ：1. Western b lot 和免疫荧光细胞化学实验结果显示 ，与正常组 比较 ，抑 郁情绪模型大 鼠血清 处理 的神经元胞 内5-HT3A 受体和 5-HT3B 受体蛋 白表达量均显著 性升高 P（ 0.05); 与模 型组 比较 ，用药治疗 组血清 处理 的神经元 5-HT3A 受体表达 量显著性 降低 P（ 0.05 ), 趋 向于正常水平 ，舒郁胶囊治疗组 、柴胡治疗组和氟西汀 治疗组之 间无 显著性差异 ；但 5-HT3B 受体 蛋 白的表达量 没有 显著变化 （P 〉0.05 )。 2.实验结果表 明，与正常组相 比，模型血清组海 马神经元 内Ca2+浓度 明显 降低 P（ 0.05 )，CaM 蛋 白表 达水平 也显著性 降低 （P 0. 05 ) ; 与模 型血清 组相 比，药物 治 疗血清组海 马神经元细胞 内Ca2+浓度较高 ，CaM 蛋 白表达水平 亦显著性升高 （P 0.0 5)，与 正常组 无 明显 差 异 （P 0.05 ) 。 3. 空 白组大 鼠海 马神经元钙离子平均荧光 强度为 205. 536 ，添加激动剂孵 育 15m in 后 ，激动剂 组神 经 元细胞 内钙 离子 荧光 强度 和 CaM 蛋 白水平表达 明显 降低 P（ 0.0 1)。事先给 予舒郁胶囊 和柴 胡含药血清干预 24h 后 ，再 次添加激 动剂孵 育 ，大 鼠海 马神经 元细胞 内钙 荧光 强度 与空 白组相 比无 明显变化 ，较 之激动剂 组有 显著性升 高 P（ 0. 05), 神 经元胞 内CaM 蛋 白表 达变化 趋 势与 Ca2+—致 。 结论 ：1.抑郁情绪模 型大 鼠血清处理 的大 鼠海 马神经元细胞 内 5-HT3A 和 5-HT3B 受体 蛋 白表 达 量均 显著性 升 高 ，证 实该 受体 与抑 郁情 绪 的密切 相 关性 。2. Western b lot 和免疫荧光实验 结果显示 ，调肝方 药舒郁胶囊及 其君药柴 胡均 可 以有 效纠正模 型大 鼠海 马神经元 中 5-HT3A 受体 蛋 白表