重组VE-cad-Fc融合蛋白仿生构建细胞外基质.pdfVIP

第 47卷 第 5期 南 开 大 学 学 报(自然科学版) 2014年 1O月 ActaScientiarumNatrali ivrsit口tiNa咒口iensi5 Vo1．47 N_O5 0Ct．2014 文章编号 ：0465—7942(2014)05—0048—06 重组VE—cad—Fc融合蛋白仿生构建细胞外基质 杜风移，于美华，赵 伟，毛宏理，姜 楠，徐建斌，杨 军 (南开大学 生物活性材料教育部重点实验室，天津 300071) 摘要：利用基因重组技术设计和构建了一种仿生的双功能仿生细胞外基质蛋 白．其基本策略是将人血管内 皮钙粘素胞外区 (VE—cad)和免疫球蛋 白(IgG1)Fc段进行基因融合构建真核表达载体 ，并利用 FreeStyle293真 核蛋 白表达系统制备融合蛋 白VE—cad—Fc，利用 Westernblot鉴定融合蛋 白，并观察 了该 VE—cad—Fc融合蛋 白 基质对人脐静脉 内皮细胞 (HUVECs)粘附和形态的影响．结果显示 ，成功克隆了VE—cad胞外段基 因，并与Fc段 重组形成VE—cad—Fc融合基因．在转染 24h后，利用兔抗人VE钙粘素胞外区抗体验明该融合蛋 白的免疫抗原 性，其分子质量约为 90．3KD，进一步的结果证明VE—cad—Fc融合蛋 白是以二聚体的形式存在．优化该制备体系 最佳表达时间为 72h．细胞试验表明，VE—cad—Fc融合蛋 白可显著促进 HUVECs的粘 附和生长．这种工程化的 多功能融合蛋 白基质在组织工程、再生医学和分子生物学领域有广阔的应用前景． 关键词 ：仿生细胞外基质 ；融合蛋 白；VE一钙粘素 ；免疫球蛋 白Fc；人脐静脉 内皮细胞 中图分类号：Q819 文献标识码 ：A 0 引 言 近年来 ，生物活性材料在组织工程领域的研究和应用引起了广泛的关注[1]．尤其是随着组织工程和再 生医学 的发展 ，基于蛋 白质工程 的生物材料对于特殊的生物学和医学研究 已逐渐成为一个新的热点领 域 ]．根据组织工程和再生医学的特定需要 (如分子量大小、组份 、序列和功能等)，通过重组 DNA和蛋白 表达等生物合成技术构建融合蛋 白大分子聚合物，制备新型仿生生物活性材料．在 日本东京工业大学赤池 敏宏研究组以前的研究中，成功构建了E钙粘素和 IgG的Fc段融合的融合蛋白(E—Fc)[3]，结果证明这 种融合蛋 白一端借助基 因突变的Fc段能稳定的吸附于细胞培养表面，另一端 E—cad段可以与干细胞形成 粘附连接 ，显著促进干细胞的粘附，并促进干细胞呈分散状单细胞层增殖及其向肝细胞 的定向诱导分化． 同时 ，利用同样的技术构建了含有上皮生长因和 Fc结构域融合 的融合蛋 白(EGF—Fc)[6]，进一步表 明该技 术可显著提高生长因子活性． 心血管疾病是一系列循环系统疾病 ，严重危害人类的健康．随着生物医学工程的迅猛发展，各种人工 血管 ，血管体内移植支架等已广泛应用于临床 [7]．但是在血管移植过程中，内皮细胞层的损伤及 内皮细胞 功能紊乱经常导致治疗的失败．目前研究结果表明，血管支架植入体内后由于不能快速被 内皮细胞覆盖 ， 致使再狭窄的概率非常高．因此 ，促进血管支架表面的快速内皮化被认为是解决血栓形成导致再狭窄的最 有希望的途径L8]．为了克服上述问题 ，构建了一种新颖 的双功能仿生细胞外基质融合蛋 白来模拟 VE钙 粘素介导的细胞间的特异性粘附，促进支架材料表面快速 内皮化．本文中，利用DNA重组技术构建一种 包含 VE钙粘素细胞外结构域和免疫球蛋 白的Fc结构域的融合体蛋白(VE—cad—Fc)． 收稿 日期 ：2014—03—10 基金项 目：国家 自然科学基金 (31O70855)；国家 973项 目(2011CB606202)；天津市科委项 目(1OJCYBJC10400) 作者简介：杜凤移 (1981一)，男，吉林敦化人 ，博士研究生． 通讯作者 ：杨军 (1968一)，男，天津人 ，博导，教授 ，研究方 向：人工肝脏及肝脏再生医学相关的肝脏组织工程．E mail：yangju