重组工程法敲除恶臭假单胞菌KT2440的染色体基因.pdfVIP

第 34卷第 4期 南京师大学报 (自然科学版) Vo1．34No．4 2011年 l2月 JOURNALOFNANJINGNORMALUNIVERSITY(NaturalScienceEdition) Dec．201l 重组工程法敲除恶臭假单胞菌 KT2440 的染色体基因 杨运文，蒋伏欢，宋 杰，尚广东 (南京师范大学生命科学学院江苏省功能微生物与功能基因组学重点实验室，江苏 南京210046) [摘要] 恶臭假单胞菌KT2440是在生物降解环境有机物和表达异源基因等方面具重要作用的环境微生物．基 因敲除是研究基因和蛋白功能的必要手段．常规的基因敲除方法往往会烦琐耗时且易引入突变的基因克隆操 作．本研究采用重组工程 (即重组酶催化的PCR产物与基因组上同源片段之间的同源重组)来实现恶臭假单胞 菌KT2440的基因敲除．本方法高效、简便、快捷且可以同时进行多个基因的操作，可成为通用的恶臭假单胞菌 KT2440的遗传研究方法． [关键词] 恶臭假单胞菌KT2440，基因敲除，重组工程 [中图分类号]Q819 [文献标志码]A [文章编号]1001-4616(2011)04-0096-06 RecombineeringM ediatedChromosalGeneKnockout ofPseudomonasPutidaKT2440 YangYunwen，JiangFuhuan，SongJie，ShangGuangdong (JiangsuKeyLaboratoryforMicrobesandFunctionalGenomics，SchoolofLifeSciences， NanjingNodalUniversity，Nanjing210046，China) Abstract：PseudomonasputidaKT2440 playsan importantroleinthedegradationofenvironmentalorganiccompounds anditisagoodhostforforeigngeneexpression．Geneknockoutisessential totheinvestigationsofgenesandproteins． Classicchromosalgeneknockoutmethodsusuallyinvolvethegenecloningsteps，whichareoftentedious，timeconsu- mingandtendtointroducemutations．Inthispaper，arecombineeringstrategycharacterizedbythehomologousrecombi— nationbetweenthePCRproductandthegenome，isusedofrtheP．putidaKT2440geneknockout．Thisstrategyishigh— lyefficient，convenient，rapidandamendableofrthesimultaneouslymanipulationofmanygenes，andcanbeusedasa generalgeneknockoutmethod． Keywords： eu如 MsputidaKT2440，geneknockout，recombineering 恶臭假单胞菌 KT2440(PseudomonasputidaKT2440)属腐生革兰氏阴性假单胞菌，具有降解环境 中有 害芳香族及脂肪族类化合物、促进化学元素循环、生物催化、生物排污、合成生物塑料等多种功能的模式环 境微生物菌株 J，也是基因克隆和蛋 白表达的首选菌株之一．P．putidaKT2440的基因组已在2002年被 测序和解析 引． 基因敲除是阐明基因和蛋白功能的必要手段．文献报道的P．putidaKT2440的基因敲除方法