实验二 培养基配制、相关器皿的包扎及消毒灭菌.pptVIP

干热灭菌需要注意的事项 1、不能对塑料器皿和培养基灭菌； 2、控制好温度和时间（160~180℃，2小时），防止包扎的报纸焦糊； 3、灭菌过程（未完全冷下来，60 ℃以下 ）不要打开烘箱门，防止报纸着火或玻璃器皿遇冷爆裂。 四、高压蒸汽灭菌锅的结构及使用 高压蒸汽灭菌的原理 高压蒸汽灭菌器是利用加压的饱和蒸汽（潜热）对物品、器械、药液等灭菌的设备，适用于科学研究、医疗卫生、食品等实验室或工厂使用——造成蛋白质等变性失活。 潜热是指当1g100℃的水蒸汽变成1g100℃水时，释放出2255.2J（1卡=4.184焦耳）的热量。 各种高压蒸汽灭菌器之间的区别只在于自动化程度的高低（水位控制、温度恒定控制、时间控制、自动排放冷空气、程序化显示） 饱和蒸汽压压力指示温度 直接利用温度探测器指示温度 典型的高压蒸汽灭菌锅纵剖面结构 压力调节器 安全阀 排气口 控制柄 记录仪 门垫圈 放电器 蒸汽阀 蒸汽夹层 阻板 蒸汽供给 蒸汽供应阀 温度感应器 蒸汽凝汽瓣 废汽冷凝器 蒸汽通入夹层 蒸汽由夹层到灭菌室 夹层冷凝水收集口 蒸汽由夹层进入灭菌室和蒸汽排出口 卧式灭菌锅示意图（简图） 蒸汽进口 灭菌过程出气口（冷空气和蒸汽） 灭菌时间到排汽口 压力表 蒸汽排气阀 温度计阀 蒸汽供应阀 门 消毒室 夹套（层） 立式压力灭菌器 手提式灭菌锅 卧式矩型和圆型压力蒸汽消毒器 实验二培养基配制、相关器皿的包扎及消毒灭菌 本次实验的目的和要求 1、明确培养基制备原理 2、通过对培养基的配制，掌握配制培养基的一般方法和步骤 3、了解消毒、灭菌的原理及方法，掌握干热灭菌和高压蒸汽灭菌 4、学习并练习相关器皿的包扎方法 实 验 内 容 一培养基及无菌水的制备 一、培养基的相关知识介绍 1、培养基的定义和组成 培养基：指由人工配制的、适合微生物生长繁殖或产生代谢产物用的混合营养基质（反映出培养基的2个作用？）。 包括六大营养要素：碳源、氮源、无机盐、生长因子、能源、水。 2、培养基制备原则和方法 四个原则：目的明确；营养协调；物理化学条件适宜；经济节约。 C/N：指在微生物培养基中所含的碳源中碳原子摩尔数与氮源中的氮原子摩尔数之比。 四种方法：生态模拟；参阅文献；精心设计；试验比较。 3、物理化学条件适宜的说明 pH值： 渗透压和水活度（aw）： 在同温同压下，某溶液的蒸气压（P）与纯水蒸气压（P0）之比。 氧化还原电位： 针对厌氧菌分离特别需要注意（不常加入半胱氨酸、巯基乙醇酸钠等？）。 （3）按培养基对微生物的功能分 基础培养基：含有一般微生物生长繁殖需要的基本营养物质。 选择性培养基：根据某种微生物的特殊营养要求或其对某化学、物理因素的抗性而设计的培养基，具有使混合菌样中的劣势菌变成优势菌的功能，广泛用于菌种筛选等领域。“投其所好、取其所抗”。——高通量筛选的建立。 鉴别性培养基：在培养基中加入有能与目的菌的无色代产物发生显色反应的指示剂，从而达到只须用肉眼辨别颜色就能方便地从近似菌落中找出目的菌菌落的培养基。——直观、专一性（伊红美兰培养基，EMB） 大肠杆菌在EMB培养基上的形态 二、培养基的配方 一个实验班共配置3种固体培养基： 牛肉膏蛋白胨培养基 高氏1号培养基 马丁氏培养基 按照老师的划分进行，每个实验小组都要准备，几个实验小组配1种培养基，供全班使用。 1、牛肉膏蛋白胨培养基 ——500ml/组（分离、培养细菌用） 牛肉膏 3.0g 蛋白胨 10.0g NaCl 5.0g 水 1000ml 琼脂 15～20g pH 7.4～7.6 可溶性淀粉 20g NaCl 0.5g KNO3 1.0g K2HPO4·3H2O 　　0.5g MgSO4·7H2O 0.5g FeSO4·7H2O 0.01g 琼脂 15～25g 水 1000ml pH 7.4～7.6 临用时无菌操作在500ml培养基中加入3%的K2Cr2O7溶液0.7ml 。 2、高氏1号培养基 ——500ml/组（分离、培养放线菌用） KH2PO4 1 g MgSO4·7H