响应面法优化Bacillus subtilis AS35产β-葡聚糖酶发酵培养基的研究.pdfVIP

固试验研究 栏 目主持人：刘润平 响应面法优化BacillussubtilisAS35 产 p一葡聚糖酶发酵培养基的研究 白晓娟 ，， 王晓闻 (1．山西晋中职业技术学院生物技术系，山西 晋中 030600；2．山西农业大学 食品学院，山西 太谷 030801) 摘要 ：为了获得高活力的 13一葡聚糖酶 ，通过响应面法结合中心组合设计优化Bac／／／ussubtilisA$35产 p一葡聚糖 酶的培养基组成，试验结果表明，当麦糟粉质量浓度为47．476g／L、蛋白胨质量浓度为 11．539gL／、磷酸氢二钾质量 浓度为2．310岛，L和Tween一8O质量分数为0．096％时，Bac／／／ussubtilisA$35的 p一葡聚糖酶活力达到32．12U／mL，优 化后获得的实验值与模型的预测值 (31．33U／mE)基本相符，且较优化前的酶活力 (15．83U／mL)提高了103％。 关键词：13一葡聚糖；13～葡聚糖酶；发酵培养基优化 ；响应面法 中图分类号：Q814 文献标志码：A 13一葡聚糖是一种结构性非淀粉多糖 ，是 自然 1．2 仪器与设备 合成 的多聚糖含量最多 的糖类 ，是 由右旋 葡萄糖 FA2004型 电子分析天平 ，由上海精 密仪 器仪 (D型) 以混合 的 13一(1，3)、 13一(1，4)糖苷键随机排 表有 限公司生产 ；HYG一11型 回转式恒温调速摇瓶 列线性连接而成 的葡萄糖聚合物 ，主要存在于谷类 柜 ，由上 海 新 星 自动 化 控 制设 备 成 套 厂 生 产 ； 胚乳淀粉细胞壁 中，是麦类籽粒半纤维素 的主要组 UV一754型紫外 一可见分光光度计 ，由上海分析仪 分之一 ”【。由于 13一葡聚糖 自身的特殊高黏性 ，在 器厂生产 ；电热恒温培养箱 ，由上海跃进医疗器材 啤酒与饲料工业生产 中引起许多不利 的影响。 厂生产 ；X一22Centrifuge型 高速 离心 机 ， 由美 国 众所周知 ，产酶培养基 的优化是提高微生物源 BeckmanCoulter公司生产 。 酶活力 的重要方式 ，其最常见 的采用方法是单次单 1．3 培养基及培养条4lt= 因素 (onevariableatli1．time)法 。但是该法在考察 斜 面 培养基 为 牛 肉膏 5g，L、蛋 白胨 10g／L、 因素较多时，需要较多的实验次数和较长 的实验周 NaC15g，L、琼脂 18g／L，pH值 7．2，0．10MPa，灭 期 ，而且不能考察各因素间的交互作用 。为了弥补 菌 20rain；种子培养基为牛 肉膏 5e,m、蛋 白胨 10 单次单 因素法 的缺 陷，现采用 中心组合试验设计和 g，L、NaC15g／L，pH值 7．0～7．2，0．10MPa，灭菌 响应面法优化 BacillussubtilisA$35产 B一葡 聚糖 20min，装液量 30mL／250mL三 角瓶 ，旋转 摇床 酶 的培养条4~-，进一步掌握该菌株 的产酶特性和提 180r／min，35℃～37oC培养 16h～18h；基本产酶 高菌种 的产酶水平 。 培 养 基 为 13一葡 聚 糖 10g／L、 (NH,)2SO 3g／L、 K2HP041．50 g／L、 MgS04．7H20 0．50e／I．、FeSO4·7H20 1 材料与方法 0．O1g／L、CaC121．50v,m 、 NaC15g／L，pH值 7．0～ 1．1 材料与试剂 7．2，0．10MPa，灭 菌 20min，装 液 量 50mL／250