响应面法优化大肠杆菌表达Hyperthermus butylicus耐热醛缩酶诱导条件的研究.pdfVIP

第 10卷第 2期 杭州师范大学学报 (自然科学版 ) VO1．1ONO．2 20l1年 3月 JournalofHangzhouNormalUniversity(NaturalScienceEdition) M |1r．2()¨ DO1：10． 69／j．issn．1674232X．20l1．02．O13 响应面法优化大肠杆菌表达 Hyperthermusbutylicus 耐热醛缩酶诱导条件 的研究 裴晓林 ，李诚璐 ，王秋岩 ，谢开林，傅陈露，张 勇，谢 恬 摘 要 ：为了提高重组而1j热 2～脱氧核糖 j磷酸醛缩酶的表达水平 ．陔文基于中心纰合实验的响应面分析方 法 ，对基 闪T程 E．coti的诱导条件进千亍了优化 ，具体考察 闪素包括诱导刹 (异丙基 口D-硫代半乳糖 ．IPTG)浓度 和诱导 日If机．实验结果表 明陔方法 r以提高 目标赁r1的表达量 依据 同归分析确定 了最件诱导条件为：IIT(；浓度 0．57mM，诱导时机 ()I ．为 0．76，理论最佳 lr)ERA 的比活 力为 1．]24Li，,nag．而实际平均 比活 达到 1．178umg． 两者几乎相等 ，说 明该模型与实 际情 基 相符． 关键词 ：2脱 氧恢精 j磷酸 缩哺 ；响应面 ；巾心绀合 ； 导条件 ；大肠lff菌 中图分 类号 ：Q8l9 文献标 志码 ：A 文章编 号：1674～232X(2O11)020l53Oj n - 一 U N —百 不对称醛醇缩合反应在精细化学品制备中是一类极为重要的反应 ，目前主要采用金属离子的催化 ，而 由醉缩酶 催化 的生物 方法 显示H{更 高 的环境 友 好性 ．2脱 氧核 糖～5一磷 酸 醛缩 酶 (2Deoxyribosej— phophatealdolases，DERAS，EC4．1．2．4)属于第 【类醛缩酶 ．催化乙醛和 I)一3一磷酸 }十油醛之 问的缩合反 应 ，形成 5一磷酸 2一脱氧核糖一!．值得注意的是，I)ERAs与其它醛缩酶 比较 ，最大的区刖 于其底物和产物 都是醛类 ，因此可 以催化连续的醛缩反应一．研究表 明，该酶 以3分子的乙醛为底物 。经过 2步连续的缩合 生成 2，4，6一三脱氧己糖，可以作为中问体应用于抗癌药物 EpothiloneA和 c、Iminocyclitols，以及降血脂 药物 Statins类 等的合成 中 jj．到 目前为 止，不 同的 DEI、As已经被报道和研究 ，包括原核 、真核和古细 菌 J，而来源于嗜热微生物 的 DERAs由于其较高的热稳定性和有机溶剂耐受性更加 引人关注．2007年 ， Sakuraba等报道了两种嗜热微生物的醛缩酶，即I)ERA 和 DERA ，显示出较高的连续催化效率和底物 耐受性 ．Wang等也报道 r不同来源的耐热 I)ERAs，表现出良好的热稳定性和乙醛而寸受性 “”． 基冈T程E．coli生产 目标产物不仅与宿主 自身的遗传特性有关 ．而且与营养环境和表达条件密切联 系，其 巾诱导剂浓度和诱导时机对重组蛋 白的表达影响最为明 。’．对重组蛋 诱导条件优化的经典方 法是单因子法 ，但是当影响凶素较多时需要大量的实验次数 ，而且可能导致不_几T靠 的甚至错误 的实验结 论 ，尤其对具有交互作用 的影响冈素．响应面分析方法 (Responsesurfacemethodology，RSM)，包括 因素 收稿 日期 ：2o1o一11o1 基金项 目：浙江 省科技厅重大项 目(2007C0l00,12)． 作者 简介 ：裴晓林 (1980 )，男 ．tlI西运城人 ，研 究实习员．硕士 ，主要 从事生物化 研究．Email：pxl@hz,lid．edu．C1] 通 信作者 ：谢 恬 (19,61 )．男．浙江武义人 ，副教授 ，博十．主要从事 中药 与天然药物研发．F～mail：tianxie@hzmt．cdttcn 杭州帅范大学学报 (白然科学版) 2Ol1年 设计和回归分析．依据有限的实验结果评价各种影响因素和构建