聚酮的异源生物合成研究.pdfVIP

疆藿Ir) 第三届蠢洋生物膏技术论坛 2005．08．19-23 聚酮的异源生物合成 董晓毅，王梁华，焦炳华 (第二军医大学基础部生物化学和分子生物学教研室，上海200433) 摘要：聚酮是一类具有抗茵、抗肿瘤和抗病原生物等广泛活性的复杂次级代谢物，由聚酮合 酶催化产生。目前已有多种聚酮合酶异源表达系统：天蓝色链霉菌是目前应用最广的异源表 达宿主，随着稳定的高拷贝表达载体的出现和其它相关表达技术的发展，有相当多的聚酮化 合物在其中获得了有效表达；经改造的大肠杆菌也可用于聚酮的异源表达，目前已在大肠杆 菌中表达了6-deoxyerythronolide 异源表达仍面临很多挑战，但随着生物技术的进一步发展，终将成为聚酮的生产平台，以解 决某些聚酮在天然宿主中含量低或来源生物难于培养等的药源问题。 关键词：聚酮合酶；宿主；天蓝色链霉菌；大肠杆菌 1聚酮 聚酮是细菌、真菌、放线菌或植物产生的一大类次级代谢产物。目前已知的聚酮超过 10，000个，一些常见的聚酮见表l。聚酮具有广泛的生物活性，包括抗病毒、抗细菌、抗真 菌、抗肿瘤、抗寄生虫、抗结核和免疫抑制等作用，广泛应用于医药、农业、工业和畜牧业， 与人类生活密切相关㈣】。 表1 常见聚酮类化含物结构分类表 2聚酮合酶(PKS) 近一十年来，有大量的聚酮合成相关基网被克隆和测序，其合成机制也基本阐明。聚酮 的生物合成由聚酮合酶(polyketide 过程，使碳链延伸，再经过环化及环化后修饰而形成。 多烯类和安莎类聚酮；II型，也称芳香类(aromatic)或迭代式PKS合成具有芳香环结构的聚酮： III型PKS属于查尔酮(chalcone)合成酶类。 I型PKS由催化距单位——模块组成的大型酶复合物，多个模块按照线性装配线的形式 排列，一个模块催化一步链的延伸反应，常以催化大环形成的硫酯为末端。其代表是红霉素 72 福建霞n 第三届海洋生物高技术论坛 200王08．19．23 都人y-300kDa。使用丙酰CoA作为起始单位，其它模块使用甲基丙二酰CoA作为延长单位， B，6-dEB)。每个模块至少包括三个 合成红霉素母核6一脱氧红霉内酯B(6一deoxycrythronolide (phophopantetheinyl 辅基…。 图I I型(红霉素)PKS模式图 II型PKS(见图2)由一套独立的4～6个单功能或双功能可重复使用的蛋白组成，每一 种酶在重复的反应步骤中都多次被用来催化相同的反应，链延长结束时，聚酮链自然环化或 芳香化ll】o 图2 ¨型(放线紫红素)PKS模式图 3聚酮异源表达 人多数聚酮类化合物结构复杂，化学合成困难或不经济，而在天然宿主体内的含量低或 米源生物生长条4-I：苛刻，冈此进行聚酮的异源生物合成可直接解决药源问题。另外，PKS基 因与聚酮合成相关的调节基因及抗性基冈在宿主基因组中往往紧密连锁，成簇排列，这为聚 酮的异源合成提供了便利条件IjJ。 如由粘细菌Sorangium bacteria)产生的，比如抗肿瘤化合物 某些聚酮是由未获得培养细菌(unculturable 租毽Iq 第三届海洋生物育技术论坛 200s．08．19-23 bryostatin—l(51，目前认为其来源二j：海洋总草苔虫(Bugula E 科研需要。 目前已异源表达成功的聚酮及其相关宿主见表2t5-181。由于候选的异源表达宿主菌(如大 肠杆菌、枯草杆菌和天蓝色链霉菌等)本身遗传背景清楚、易于操作、生长特性良好、相关 基冈操作T具成熟，便于构建高表达基冈工程菌。 表2 1993年以来异源表达成功的聚酮类化合物举例 host compound