CLOCKBMAL1调控脱腺苷酶Nocturnin转录的机制研究及钟控microRNA的鉴定研究.pdfVIP

北京协和医学院博{‘研究生论文 414281 y1 钟控microRNA的鉴定 研究生： 李然 导师： 曹济民教授 导师组： 彭小忠教授 学科专业： 生理学 研究方向： 钟控基因的转录调控研究 所在院所： 中国医学科学院基础医学研究所 北京协和医学院基础学院 入学时间： 2005年8月 北京协和医学院博?l：研究生论文 中文摘要 Noct啪in是具有生物节律转录特点的基因之一，在I必A水平具有明确的同节 具有的结构域从酵母到人都具有高度的保守性。Noctumin功能研究发现它具有脱腺 苷酶(deadenylase)的作用，参与mRNA的降解以终止翻译过程。 Noct啪in基因敲除小鼠的脂肪积累能力和野生型对照相比明显下降，当饲喂高 脂饮食时，基因敲除小鼠对肥胖和脂肪变性的抵抗能力明显强于野生型对照小鼠， 并且基因敲除小鼠的脂肪、肌肉和肝脏的胰岛素敏感性明显增强，而胰腺的葡萄糖 反应性下降。可见在正常情况下，Noctumin的作用在于调节代谢的昼夜节律性变化。 肥胖和高血脂在世界范围内都是公认的影响人类健康的疾病并且受到广泛的关注。 关的一些未知生理功能有重要意义。尽管Noctumin作为钟控基因是分子生物钟调控 细胞代谢功能的一个重要因子，但分子钟调控Noctumin的机制尚不十分清楚。 元件(NoctuⅡ1in 基因一样，节律表达受到了影响。这说明高等动物的Noct啪in的节律表达可能不同 们并没有证实这种可能性。我们的此项研究工作的主要目的是阐明Noctumin的转录 激活是否是由CLOC刈BMALl异二聚体通过结合于E-box所致。 然后，我们进一步采用染色体免疫共沉淀技术发现Noct啪in的转录可能直接受到了 CLoCl∽3MALl的调控。 变化趋势，即在CTl6．20，CT40和CT68(CT，cirCadiantime)三个时间点达到峰值， 2 北京协和医学院博、I：研究生论文 结果一致。 为了进一步对Noctumin启动子区E．box的功能进行检测，我们首先利用荧光素 此外，依据节律基因调控机制中钟控基因很大程度上依赖于转录因子CLOCK 同的，所以我们认为应该存在具有钟控基因一样的转录调控机制的钟控micr0IⅢA。 我们根据JohnKim等人在人、小鼠和大鼠脑组织中特异表达microRNA的鉴定结果 在人、小鼠和大鼠中的同源性挑选出候选的钟控microIⅢA。再进一步进行染色体免 疫共沉淀验证，并在小鼠转录模型中验证这些microRNA的表达变化。从而我们发现 参与到分子生物钟的microRNA的调控机制和功能提供了基础。 个钟控microIⅢA(miRl40、miR329和miR337)。 关键词：Noctunlin，E-boX，生物钟，转录调控，钟基因，钟控基因 3 北京协和医学院博}：研究生论文 Abstract Noctuminisoneofmecircadiallwhichshow oscillationin genes day-night n锄e‘noctumin’c锄ef如mthe ofits leVel tmscription．The