食品级木聚糖酶的工业化生产研究.pdfVIP

发酵工程学科的进展 ——第四次全国发酵工程学术讨论会论文集 食品级木聚糖酶的工业化生产 袁建国1， 李峰2， 段 峰3， 徐军庆3， 杨丹3 (1．山东省食品发酵工业研究设计院，济南250013；2．山东省中协食品添加剂研究开发中心，济南 250013I 3．济南高新区京鲁生物技术研究开发中心，济南250013) 摘 要：从自然界筛选出产木聚糖酶的出发茵株，然后进行诱变育种，获得了一株高产优良 菌株，经过液体深层发酵生产木聚糖酶，发酵液经絮凝技术、膜过滤技术、新型的高分子澄清 剂和酶保护藕处理后，提高了酶的纯度和活力，产品性能稳定。产酶水平达35COF．／ml以上， 总收率达87％以上，固体酶粉达150000～200000p／g。 关键词：木聚糖酶f液体深层发酵f工业亿 前 言 木聚糖酶(1，4-p—D-xylan 一木聚糖酶、外切B一木聚糖酶和p一木二糖苷酶。本项目生产的木聚糖酶属内切酶，分子量 22000，酶的最适pH为7．2，最适温度为50℃，热稳定性高，保质期一年内损失小于5％。 本研究主要是在国家”九五”科技攻关研究的基础上，对木聚糖酶产酶菌株通过物理 化学的诱变方法，选育出高活力菌株，通过深层发酵工艺，进行了30吨发酵罐的连续二 级发酵产酶和酶提取试验，确定了食品级木聚糖酶发酵及提取生产工艺。在酶法生产低 聚木糖上及粮食深加工方面进了应用实验，取得了良好的效果。 1 材料与方法 1．1实验材料 菌种：短小芽孢杆菌(Bacilluspumilus)，2—4。 HPO。、NailzPO。。 原料：麸皮、豆饼粉、玉米芯等均为市购，DNS试剂，Naz 1．2实验方法 ． 1．2．1菌种选育 出发菌株：菌种2—4，发酵酶活力120p／ml。在”九五”期间采用复合诱变的方法，将 菌种的产酶水平提高到1450p／ml，经传代培养产酶情况稳定。”十五”研究期间，采用uv 诱变的方法，再次提高了菌种的产酶水平，产酶水平达到3500F／ml以上。 1．2．2生产实验 采用茄瓶种子一3m3种子罐30m3发酵罐的工艺路线，种子罐培养基与发酵罐培养 基均采用原摇瓶培养基配方。种子罐发酵培养10h左右，开始进行镜检，观察细菌的形 态，测定细菌个数，pH值等指标的变化情况。12h左右，菌种达到对数生长期，转接二级 l 发酵罐，发酵温度31～32℃，罐压0．5--0．8kg／cmz，通气量08h为10．5，8-．,15h为1 袁建国等：食品级木聚糖酶的工业化生产 621 ：0．8，15h以后为1：0．5。发酵10h后开始进行酶活检测，18小时酶活达最高放罐。 1．3酶活力定义 糖计)的酶量为1个酶活力单位。 2结果与讨论 2．1菌种鉴定与安全性检测 2．1．1中国科学院微生物研究所对该菌种的鉴定 该菌株属于芽孢杆菌属，短小芽孢杆菌(Bacilluspumilus)。 2．1．2产酶菌株毒力试验 产酶菌株经中国疾病卫生防疫控制中心进行菌种毒力试验检测，检测结果表明：短 小芽孢杆菌的BCP培养原液和5倍浓缩液组与各自对照组相比，小鼠体重增长无显著性 差异，同时未观察到受试小鼠有毒性反应或死亡，即该菌株不产毒。 2．1．3产品安全性毒理学试验 该菌株生产的木聚糖酶经山东省疾病预防控制中心进行毒理试验证实，该酶是安全 的。小鼠急性毒性试验表明该样品属实际无毒物质；Ames试验：结果为阴性；小鼠骨髓 嗜多染红细胞微和试验结果为阴性；小鼠精子畸形试验：结果为阴性；大鼠90天喂养实 验表明该样品90天喂养对大鼠各项观察指标未见毒性作用。 2．2发酵条件研究 2．2．1发酵温度对产酶的影响 结果见右图，最佳发酵温度为32℃。 2．2．2诱导物对产酶的影响 木聚糖酶是诱导酶。以水洗麸皮为对照，添加进口木聚糖、玉米芯木聚糖、玉米芯液 体木聚糖。见下图添加进I=l木聚糖产酶最