高产3羟基丁酮枯草芽孢杆菌的选育研究.pdfVIP

摘要 本文以一株实验室保存的枯草芽孢杆菌YD．1为出发菌株。该菌株的较适碳源 为葡萄糖，较适氮源为玉米浆和酵母粉，发酵过程中需要添加的金属离子为Mn2+， 下摇床发酵3天，3一羟基丁酮产量最高可达15．60∥L。 以YD．1为出发菌株，用紫外线进行诱变，经过初筛和复筛其产量从15．609／L 提高到17．789／L，之后以硫酸二乙酯诱变，经初筛和复筛获得目的菌株S．10，产量 19．029／L，较出发菌株提高21．92％。 对诱变菌株S．10进行遗传稳定性实验，将S．10在斜面上连续传代20次，分别 取第l、5、10、15、20代进行发酵，测定其3．羟基丁酮产量，结果证明该菌株遗传 稳定性良好，具备作为生产菌株的潜力。 对菌株S．10的生理生化特征进行初步研究。与出发菌株YD．1相比，诱变菌株 S．10死灭温度提高l℃，发酵液的颜色发生一定变化，培养14h的诱变菌株在显微 镜下观察时发现更容易串联生长，其他生理生化指标无明显变化。 实验确定发酵液的最佳碳源为葡萄糖，最佳氮源为酵母粉与玉米浆的混合物。 研究了二价金属离子M92+、Zn2+、Mn2+与三价金属离子Fe对发酵产物的作用，四 种离子均有促进作用，其中，Mn2+促进作用最为明显，其他离子作用相对较小。优 化后，3．羟基丁酮产量提高到19．88∥L。 优化S．10的发酵条件，其最佳发酵条件为pH7．0，温度36℃，装液量30mL， 接种种子为8h种子，接种量5％，摇床转速180r／min，发酵时间84h。优化后，产 量高达20．509／L。 对两株枯草芽孢杆菌进行SDS．PAGE凝胶电泳，发现二者在蛋白质水平上无明 显差异。进一步采用RAPD技术，对枯草芽孢杆菌YD．1和诱变菌株S一10进行DNA 水平上的遗传物质分析，发现二者电泳图谱存在差异，由此判断突变株在DNA水 平上发生了轻微改变，是一株高产3．羟基丁酮的枯草芽孢杆菌新菌株。 关键词：枯草芽孢杆菌；诱变；RAPD；SDS．PAGE l l II IIIIII Il llIII lUll Y2044004 Abstract niS takesabacillussubtilisstrainYD．1 inour asthe laboratory paper preserved strain．T11e carbonsourceis andthe sourceis original optimal glucose optimalnitrogen Mn2’are and ions needinthefermentation strain powder．Metal syrupyeast process．111e waswell withtheinitial of mediumunderthe 37℃、 produced pH7．2liquid temperature 35mLoutfitfluid seed、5．7％vaccination80r／minconditionsin quantity、lOh quantity、l tablefor3 acetoincanreachtol5．60 shaking days．The yield