梣酮在白鲜皮中的分离及其抑菌活性实验.docVIP

精品论文 参考文献 梣酮在白鲜皮中的分离及其抑菌活性实验 谢瑞强1 李磊2 丛欢3 （1北京科信必成哈尔滨分公司 黑龙江哈尔滨 150040）（2齐齐哈尔医学院附属第二医院 黑龙江齐齐哈尔 161000）（3齐齐哈尔医学院 黑龙江齐齐哈尔 161000） 【摘要】目的 利用柱层析和高效液相在酒精提取的白鲜皮氯仿层中分离梣酮。方法 利用柱色谱分离手段分离梣酮，之后用核磁、高效液相色谱等方法进行验证，通过抑菌环实验验证其活性。结果 所提取物质谱图与相关文献一致鉴定为梣酮，纯度为97.74%,梣酮对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、变形杆菌的抑制直径为19 、20、17mm，抑菌率分别为64%、70.4%、65.7%。结论 分离物质为梣酮，且对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、变形杆菌均有一定的抑制活性 【关键词】 白鲜皮 梣酮 抑菌活性 白鲜皮为芸香科植物和狭叶白藓（又名新疆白鲜）的干燥根皮，味苦性寒,归脾、胃、膀胱、小肠经，是皮肤病的常用中药，具有清热燥湿、祛风解毒、杀虫止痒的功效，常用于治疗湿热疮毒、黄水淋漓，湿疹、疥癣、风湿热痹、黄疽尿赤等症[1]，尤其善于治疗湿疹的风热证和湿热证，在我国分布于东北、华北、华东及河南、陕西、甘肃、四川、贵州等地[2][3]。梣酮为白鲜皮中主要活性物质之一，梣酮具有抗致敏T细胞增殖、抗生育、杀虫，扩张血管等活性，在药用白鲜皮中含量约为0.128%，为柱层析提取分离提供了可行性 1 仪器与材料 1.1 仪器 EYEL4 N-1100旋转蒸发仪（上海爱郎仪器）、Waters 600 controller 高效液相色谱仪，配备Waters 2487 dual lambda; absorbance detector（美国waters公司），Agilent TC-C18 分析柱(美国Agilent公司) 、SHZ-D(Ⅲ)循环水式真空泵（上海华宇仪器）HP5988A质谱仪（美国惠普公司）AM-400核磁共振仪（瑞士布其公司）、MP-J3熔点测定仪（日本岛津公司）、UV-Ⅲ三用紫外分析仪（北京普析通用） 1.2 材料 白鲜皮二氯甲烷层、石油醚30-60(分析纯)、甲醇（分析纯、迪马色谱）、超纯饮用水（娃哈哈公司），GF薄层硅胶（254、青岛海洋化工）、柱层析硅胶（青岛海洋化工），10%硫酸乙醇显色剂 2 方法与结果 2.1 化学物提取 称取白鲜皮氯仿层药物380.2g，采取湿法上柱方式进行装柱，以二氯甲烷和丙酮混合溶剂为洗脱液，采取梯度洗脱方法，收集馏分共计236瓶，根据薄层色谱检视，合并3-9瓶，得油状固体混合物，放置24h，沉淀后分离油层，得固体层120g，记为H1，采用石油醚丙酮系统对H1进行梯度洗脱，收集馏分共计532瓶，合并29-69瓶，记为H2，再次采用石油醚丙酮系统对H2进行梯度洗脱，收集馏分共计42瓶，合并9-37瓶，挥干有机溶剂得干燥白色晶体，采用石油醚反复润洗，挥干溶剂后，将样品溶于二氯甲烷中，重结晶后，得无色棍状结晶，重量为19g，在254nm荧光检识下有暗斑，经硫酸乙醇显色剂显色后，呈暗绿色斑点。 2.2 高效液相色谱检验 制备0.1mg/ml样品甲醇溶液，取流动相甲醇：水为60:40，峰面积为97.74%结果见图1 图1 2.3 结构鉴定 化合物：无色棍状结晶，mp 170℃。分子式：C15H18O2。1H-NMR(CDCl3) delta;:7.47,7.44,6.34(H,Fura),4.88(1H-8,s),2.13,0.86(2times;CH3，s)13C-NMR(CDCl3) delta;:18.4(C-1),18.2(C-2),31.6(C-3),148.5(C-4),127.4(C-5)169.8(C-6),83.4(C-7),42.9(C-8),32.0(C-9),20.3(C-10),120.6(C-11),143.4(C-12),108.5(C-13),139.7(C-14)。以上数据与文献[4]报道一致，故鉴定化合物为梣酮。 2.4 抑菌试验 配制0.1mg/ml梣酮甲醇???液，取干净滤纸，用打孔器截取6mm直径纸片，在上述溶液中和甲醇溶液中分别浸润3片，在1小时之后取出阴干，将其分别放入3种含菌培养基中，将培养皿密封好，放入37℃培养箱中，24h后取出，测量抑菌环直径，分别对三种菌种做3次平行实验，取平均值，计算抑菌率，结果见表1 抑菌率（%）=（样品抑菌环直径-对照品抑菌环直径/样品抑菌环直径）times