正相高效液相色谱法测定明党参中天门冬酰胺的含量.docVIP

精品论文 参考文献 正相高效液相色谱法测定明党参中天门冬酰胺的含量 （1浙江大学医学院附属儿童医院 浙江 杭州 310003） 　　（2浙江省立同德医院 浙江 杭州 310012） 　　（3浙江中医药大学 浙江 杭州 310053） 　　（4惠氏制药有限公司 江苏 苏州 215128） 　　【摘要】 目的：建立正相高效液相色谱法测定明党参中天门冬酰胺含量的方法。方法：色谱柱为Venusil HILIC（5mu;m，250times;4.6mm）；流动相为V（乙腈）：V（0.5%磷酸二氢钾水溶液）=78：22；检测波长为203nm；流速为1.0mL/min；柱温为25℃。结果：平均回收率为99.32%，RSD为3.16%。该方法的标准曲线为Y=9698261X +51964，相关系数gamma;为0.9997。结论：该方法简单，准确性、重复性好，适用于明党参药材的质量分析。 　　【关键词】 明党参；天门冬酰胺；正相高效液相色谱法 　　【中图分类号】R927.2 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2016）30-0370-02 　　明党参为伞形科Umbelliferae芹亚科Apioideae Drude美味芹族Smyrnieae Koch植物明党参的干燥根。典籍记载明党参具有滋补强壮、润肺化痰、平肝解毒、安中和胃等功效。现代化学研究表明，明党参主要含有多糖、挥发油、磷脂类、脂肪酸、氨基酸等多种化学成分[1]。天门冬酰胺作为止咳平喘的主要有效成分[2]，可以在一定程度上作为质量评价标准。因此，我们建立了新的明党参天门冬酰胺含量分析方法，并首次测定浙北地区的明党参中天门冬酰胺含量，为浙江省内明党参药材的质量评价提供依据。 　　1.材料与方法 　　1.1 材料 　　1.1.1仪器：Varian Prostar 高效液相色谱仪（230三元泵，410自动进样器，330二极管阵列检测器）；Venusil HILIC色谱柱（5mu;m，250times;4.6mm）；微孔滤膜0.45mu;m；隔膜真空棒（津腾）；Sartorius-BS210s电子天平(德国赛多利斯)；脂肪测定仪SZF-06A(上海新嘉电子有限公司)；电热恒温水浴锅（上海医疗器械五厂）；超声波清洗器KQ3200DB(昆山市超声仪器有限公司)。 　　1.1.2药材：药材（见表1），打粉，过筛备用。 　　表1 明党参药材样品表 　　 　　1.1.3试剂：天门冬酰胺对照品（中国生物制品检定所），乙腈（色谱纯，默克公司），水为重蒸水，其它试剂为分析纯。 　　1.2 方法 　　1.2.1对照品溶液的制备：精密称取对照品L-天门冬酞胺11.8mg，置10ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得浓度为1.18mg/ml的对照品溶液。 　　1.2.2实验方法优化：精密称取本品粉末1.0g，分别加水，30%乙醇，50%乙醇，70%乙醇各50ml，回流提取30min；另取2份平行样，置回流瓶中，加水50ml，分别回流提取15min，30min，45min，放冷，摇匀，滤过，取续滤液10ml，置水浴锅上挥干溶剂，定容在10ml容量瓶中，进样10mu;L，结果表明水提30min天门冬酰胺的含量最高。 　　1.2.3供试品溶液制备：精密称取药材粉末1.0g，置回流瓶中，加水50ml，回流提取30min后，放冷，再称定重量，用水补足减失的重量，滤过，取续滤液备用。 　　1.2.4色谱条件：色谱柱：Venusil HILIC色谱柱（5mu;m，250times;4.6mm）；流动相：V（乙腈）：V（水）=78：22；检测波长：203nm；流速：1.0mL/min；柱温：室温25℃；进样量：10mu;L。对照品溶液和供试品溶液分别进样10mu;L，记录色谱图，天门冬酰胺的保留时间为18.3 min（如图1）。 　　 　　1.2.5线性关系考察：精密量取天门冬酰胺标准品（1.18mg/ml）适量，分别稀释为0.0708，0.118，0.236，0.472，0.708，0.944，1.18mg/ml，以纯水为空白对照，分别进样10mu;L。采用外标法，以峰面积为纵坐标(Y)，以质量浓度为横坐标（X)，建立标准曲线。结果表明天门冬酰胺在0.0708～1.18mg/ml浓度范围内，峰面积与质量浓度呈良好的线性关系，回归方程方程Y=9698261X +51964，相关系数gamma;为0.9997。 　　1.2.6精密度试验：取对照品溶液，按上述色谱条件连续进样6次，分别测定峰面积，结果天门冬酰胺的RSD=1.07%。 　　1.2.7重现性试验：随机取同一批明党参药材6份各1.0g，精密称定，按上述方法制备