液质连用.ppt

液相色谱-质谱联用技术 概述 色谱质谱的在线联用将色谱的分离能力与质谱的定性功能结合起来，实现对复杂混合物更准确的定量和定性分析。气质联用仪分析仪器中较早实现联用技术的仪器。相继地，液相色谱-质谱（LC-MS）联用技术自70年代以来，经过20多年的发展也日渐成熟，应用广泛。 概述——质谱 液相质谱的组成： 液相色谱系统、真空系统、进样系统、离子源、质量分析器、数据处理系统 LC-MS仪器的配置 质谱仪的配置——样品导入系统 与LC联机导入系统 样品导入系统——与LC联机导入系统 与LC联机导入系统: 采用“泵-分离柱-ESI接口”的串联方式，有时在分离柱接口加一个T形三通（另接一检测器，或进行柱后补偿或修饰）。 优点：快速、简单、可自动化、对浓度要求不高。 缺点：仪器比较复杂，流动相同时满足离子化接口和LC的特点 样品导入系统——直接注入方式 直接注入方式：以注射器泵推动一支钢化玻璃注射器将样品溶液连续注入离子化室。进样量＞10 μl，组成一般不多于5个，浓度适中。在仪器调校时或测定化合物纯品的质谱图时使用。 优点：简单、快速。 缺点：样品量要求较大，干扰因素多，自动化程度低 样品导入系统——流动注射分析方式 流动注射（FIA）：用注射器泵串接一个流通阀或以LC泵配合进样器进行。注入速率由喷雾方式和进样量决定。进样1~10 μl，组成小于5个，浓度适中。可快速获得样品质谱信息，预试验中实用。 优点：简单、快速、可自动化、需要的样品量少 缺点：有稀释作用，使峰展宽。 质谱仪的配置——接口与离子化方式 接口——作用及种类 接口在液质联用技术中的主要作用 将流动相及样品雾化，分离除去流动相分子 完成对样品分子的电离 接口——作用及种类 API——ESI 电喷雾离子化ESI 组成 原理 影响因素 ESI——组成 ESI-MS接口示意图： ESI——原理 气动辅助垂直喷雾ESI的主要过程： ESI——原理 原理： 通过电场使雾滴带电，然后通过离子蒸发等机制生成气相离子，再送入MS的过程。将离子由液相转至气相为强吸热过程，能量大于C-C键断裂能。但ESI可在相对低温下，逐步去溶剂化，是最软的质谱离子化方式。 ESI——原理 ESI实质：在强电场影响下对高电带电液滴进行精细雾化。 雾滴形成过程； 雾滴变小过程； 气相离子形成过程。 ESI——雾滴形成过程 ESI——雾滴形成过程 ESI——雾滴形成过程 ESI——雾滴变小过程 雾滴蒸发过程与雾滴起始尺寸和电荷相关。 决定雾滴半径的重要参数是流速和溶液导电率。 低流速和高导电率产生细雾滴。 ESI——气相离子形成过程 ESI——影响因素 离子化程度：与待测组分的pKa和溶液的pH有关。使待测成分在溶液中为离子状态。 喷雾状态：与溶液表面张力、黏度、流速有关 去溶剂程度：与干燥气的温度和流量及溶剂的蒸发热有关 气相离子的生成：与离子表面活性有关。采用表面活性低的缓冲剂，低浓度挥发性酸、碱和缓冲盐，用高纯溶剂、试剂，样品前处理，除干扰物和盐。 ESI是浓度型检测器：样品量有限时,流动相流速和柱内径是影响灵敏度主要因素。 ESI——特点 浓度型检测器，分流不影响结果 优点： 可同时收集经色谱纯化的样品； 可同时使用与质谱平行的另一检测器 以较低速度通过离子源以提高离子化效率； 只一小部分样品进入离子源，可保持质谱清洁。 API——APCI 大气压化学离子化APCI 组成 原理 与ESI比较 APCI——组成 APCI——原理 原理： 在大气压条件下采用电晕放电方式使流动相离子化，然后流动相作为化学离子反应器（气相试剂）使样品离子化的技术。样品分子的离子化通过质子化或电荷转移，去质子,电子捕获及形成加合物等方式来实现。 APCI与ESI比较 ESI： 电喷雾。适于中、强极性化合物。 对流动相组成有要求。 APCI： 热喷雾（样品溶液通过雾化器喷入高温蒸发器，溶剂和溶质均为气态）。适于非极性、中等极性小分子。不适于热不稳定、难于气化的极性和大分子化合物。 离子化过程对流动相组成依赖小。 APCI与ESI比较 API——APPI 大气压光离子化原理： 待测物在气相中吸收由真空-紫外灯(VUV lamp)发出的光子后放出电子从而离子化的过程 可用来提高LC-MS对非极性有机化合物的响应,作为一种新的API技术，是ESI和APCI应用的补充。 APPI——组成 APPI——特点 优点： 与ESI和APCI有同样或更