MS2介导的口蹄疫类病毒颗粒疫苗的研讨.pdfVIP

第 52卷 第 2期 厦 门大学学报 (自然科学版) VoL52 No．2 2013年 3月 JournalofXiamenUniversity (NaturalScience) M ar．2013 MS2介导的口蹄疫类病毒颗粒疫苗的研究 董艳美 ，张国广 ，汪 卫 ，范红军。，陈 亮 (1．厦 门大学生命科学学院，福建 厦 门 361102；2．漳州师范学院生命科学与技术系， 福建 漳州 363000；3．河南师范大学生命科学学院，河南 新乡 453000) 摘要 ：研究表明，El蹄疫病毒(Foot—and—mouthdiseasevirus，FMDV)的VP1蛋白含有关键的抗原决定簇．根据 O／HL JOC12／03猪源 FMDV毒株 VP1上第 141～160位氨基酸序列设计 引物 ，利用重叠延伸 PCR(SOEPCR)技术将该序列 插入在大肠杆菌 (Escherichiacoli)噬菌体 MS2外壳蛋 白基 因的特定位点．然后连接到原核表达载体 pET28a上 ，构建 了 重组表达质粒 28a—CP—VP1，转化 BL21(DE3)，ITPG诱导表达得到融合表达的 CP—VP1．透射 电子显微镜下观察融合蛋 白CP—VP1成类病毒颗粒 (virus—likeparticles，VLPs)状 ．间接 ELISA实验证实该蛋 白能够特异地结合豚鼠抗 0型 FM— DV 的阳性血清 ，30 g的CP—VP1的VLPs蛋 白免疫小 鼠后可以诱导其产生高效价 的特异抗体．故该 口蹄疫病毒抗原决 定簇展示在噬菌体 MS2上表面 的VLPs蛋 白具有开发成 口蹄疫疫苗 的前景． 关键词 ：VI蹄疫 ；MS2噬菌体；抗原决定簇 ；类病毒颗粒 中图分类号：Q78 文献标志码：A 文章编号 2013)020237—07 口蹄疫 (Foot—and—mouthdisease，FMD)是 由 口蹄 外 ，灭活苗的有效期较短 ，诸如此类的缺陷使得寻找更 疫病毒 (Foot—and—mouthdiseasevirus，FMDV)引起 安 全 稳 定 的新 型疫 苗 成 了科 学 工 作 者 的大 方 的危害牛、猪 、羊、骆驼、鹿 、牦牛等约 70种家畜及野生 向[3,1oqz]．与传统疫苗相比，基 因工程疫苗是一类非常 偶蹄动物的一种急性 、热性、高度接触性传染病口]．因 安全高效的疫苗． 为其一旦爆发则传播速度快 ，流行范 围广 ，补救措施 大肠杆菌 (Escherichiacoli)MS2噬菌体属于正 少 ，可造成上百亿美元 的直接经济损失 ，故被世界动物 极性单链 RNA球形病毒 ，基 因组全长 3659bp，编码 卫生组织 (OIE)列为必须报告 的动物传染病 ，我国规 成熟酶蛋白(或 A蛋 白)、外壳蛋 白、复制酶蛋 白和裂 定其为一类动物疾病_ll]．FMDV为单股正链 RNA病 解蛋 白等 4种蛋 白质分子_1¨]．研究发现 ，体外将 毒，主要有 7个血清型_6。]，近年来 ，爆发流行于我国境 MS2噬菌体的成熟酶蛋 白和外壳蛋 白的基因以及包 内的大都是 O 型、A 型和 AsiaI型ll5．自缅甸 98 含基 因调节元件的 5 E编码序列 的基 因克 隆到表达 (MYA98)谱系 FMDV 2010年 2月在我 国广州 白云 载体 中，诱导表达后的蛋 白可 自我组装为成熟的类病 区疫区首次发现以来 ，该病毒 已经持续地给我国多省 毒颗粒 (virus—likeparticles，VLPs)[1516]，且在其外壳 的畜牧业造成了巨大的损失 ，并且该病毒在不同宿主 蛋 白基因的特定位点处插入几个基因可 以表达成外源 变异较大．虽然传统的灭活疫苗的免疫原性比较好 ，也 氨基酸展示 的 VLPs状ll。 ，以此 ，我们可 以开发 出 在 FMD疫情的控制和在动物保护上发挥 了极其重要 VLPs疫苗．VIPs疫苗作为一种新型 的基 因