高效阴离子交换色谱积分脉冲安培检测法分析注射液中的氨基酸研究.pdfVIP

囝 437 ＼：。gj少 第十二届全国离子色谱学术报告会论文集福建厦门2008．11．5-8 高效阴离子交换色谱积分脉冲安培检测法分析注射液中的氨基酸 梁立娜，牟世芬 中国科学院生态环境研究中心环境化学与生态毒理学国家重点实验室，北京100085 shifenm@：rcees．ac．cn 摘要：建立了高效阴离子交换色谱积分脉冲安培检测器分离并测定注射液中18种常见氨基酸、N．乙酰一L半 gm尼龙膜过滤 胱氨酸、氨基己酸和牛磺酸含量的方法。注射液用20mg／L的NaN3溶液稀释1000倍，经0．22 后直接进样分析。以一定浓度的NaOH和NaAc溶液为淋洗液，选择合适的梯度淋洗条件。21种氨基酸在 AminoPacPAl0阴离子交换色谱柱上在30rain内很好地分离，并用脉冲安培检测器进行了测定。氨基酸的检 出限在0．14~3．81 pmol。方法无需衍生，操作简单，灵敏度高，干扰少且重现性好。 关键词，氨基酸；高效阴离子交换色谱；积分脉冲安培检测器；注射液 氨基酸是生命活动过程的基本物质之一，在整个生命过程中发挥非常重要的作用。N．乙 酰．L半胱氨酸、氨基己酸和牛磺酸等为人体非必需氮基酸，但是这三种氨基酸在治疗各种疾 病方面有着非常重要的作用。如N．乙酰．L半胱氨酸主要用于手术、严重创伤、大面积烧伤引 起的严重氨基酸缺乏，以及各种疾病引起的低蛋白血症。牛磺酸可以防治心脏问题，癫痫、 糖尿病、关节炎及药物中毒等。氨基己酸是一种促凝血药，可抑制纤溶酶激活因子和纤溶酶 及其他蛋白溶解酶。因此，这三种氨基酸常常被制作成注射液用于上述疾病的治疗。 目前氨基酸的分析方法有柱前衍生高效液相色谱法【1。31、柱后衍生高效阳离子交换色谱法 ㈣、毛细管电泳法[7】等。由于大部分氨基酸分子结构中没有发色团，上述方法均需进行衍生 化处理，但衍生法通常有操作繁琐、衍生不完全、衍生产物不稳定以及过量的衍生试剂干扰 后续测定等问题。 高效阴离子交换色谱一积分脉冲安培法是近年来出现的一种直接测定糖和氨基酸的方法 【眄】。该方法不需要衍生处理，使用一定浓度的NaOH和NaAc作淋洗液梯度淋洗，常见的18 oJ、 种氨基酸可以实现分离并被检测。该方法简单、方便且灵敏度高，已经成功地应用于绿茶【l 生物样品㈣和土壤提取液【12】、酱油【13】等样品中常见氨基酸的测定，而注射液中常见氨基酸与 N．乙酰．L半胱氨酸、氨基己酸和牛磺酸的同时分析应用尚未见相关报道。 1实验部分 1．1仪器与试剂 ICS3000多功能色谱装置(Dionex，美国)，包括双泵模块、检测器／色谱模块、自动进 样器模块。双泵模块中包含一个单元泵和一个四元梯度泵，其中四元梯度泵用于氨基酸的分 析；检测器／色谱模块中放置进样阀、分析柱和脉冲积分安培检测器，温度均设为30℃，脉 6．7色谱 冲积分安培检测器用金工作电极，pH／Ag／AgCI参比电极，钛对电极。Chromeleon 工作站，超纯水设备(Bamstead，IA，USA)。 18种常见氨基酸(生化级标准，上海康达生物制品有限公司)，氨基己酸(Sigma)，牛磺 Certified，Dionex，P／N05932)i 酸(Sigma)；无水醋酸钠(AAA．Direct Aesar)和叠氮化钠(北京化学试剂公司)。 ◎ 438 第十二届全国离子色谱学术报告会论文集福建厦门2008．11．5-8 1．2溶液制备 18种常见氨基酸标准储备液浓度约为10 mg／L。氨基己酸和牛磺酸标准储备液浓度约为 1000mg／