细胞工程-9 染色体工程.pptVIP

（3）雌核发育的鉴别 经人工或自然诱导的雌核发育个体，需经一定的 鉴定，以证明它确属雌核发育的个体，精子在胚胎发育 中确实没有在遗传方面做出贡献。 鉴别雌核发育的个体，通常以颜色、形态以及生化等方面的指标为依据。例如，鲤鱼中，用辐射处理正常全鳞片鲤鱼的精液，授予具散鳞片类型的鲤鱼卵，获得100%散鳞片子代，表明为100%的雌核发育个体。 通过细胞学的研究能更精确的判别雌核发育。若是雌核发育，其囊胚细胞中只出现一套来自雌核的染色体，否则雌核和雄核染色体各占一半，得到的是杂交种。 （一）动物染色体结构的改造的方法 1. 放射线诱导 放射线诱导可以使染色体产生缺失、易位、倒位、 复制及基因内的点突变。 例如，? 利用ES细胞诱导产生突变，再将带有突变的 ES细胞植入小鼠的囊胚，从而产生带有突变 的个体，进一步进行功能的研究。 ? Thomas等用此方法在小鼠的9号染色体的 Ncam位点，产生了一系列的缺失突变，缺失 的大小都在3cM以下，有的可达35cM,缺失图 谱几乎包括了9号染色体的一半，为研究9号 染色体的功能提供了很好的材料。 放射线诱导产生的突变不能定位，随机发生。 三、动物染色体结构的改造 2. Cre/ loxP介导染色体重组 Cre/ loxP是一种常用的重组系统。Cre重组酶是 在噬菌体P1中发现的一个38kDa的蛋白质，其名称来源于cause recombination，它能识别34bp的特异序列（ loxP ）,介导两个loxP之间的序列发生重组，此过程不需要任何其他辅助因子的帮助， loxp的位置和方向不同，Cre重组酶介导形成的产物亦不同，可以导致染色体的删除/整合、倒位、易位，实现染色体的定点操作。 loxP （locus of crossing over(x) in p1）的序列特征： LoxP位点是一段含有34个碱基对的序列，其两 端为13bp的反相重复序列，之间有一个8bp的不对称核 心序列，决定 LoxP的方向。 ?一个线形DNA分子或染色体上有两个同向的loxP位点时，经 Cre酶作用，位点之间的片段被环化，游离于线形DNA分子或染色体之外，此时线形分子或染色体和环状分子上各留一个loxP位点。 ——删除 ?上述过程的逆向过程就是一种整合的过程。——整合 ?一个线形DNA分子或染色体上有两个反向的 loxP位点时， Cre酶作用后发生位点之间片段的倒位——倒位 两个线形DNA 分子或染色体上各有一个或两个同向的loxP位点时， Cre酶可导致分子间片段的转位。——易位 （二）染色体易位工程实例 雄蚕茧比雌蚕茧出丝率高20%以上，体质比雌蚕 要强壮，养蚕生产上所用一代杂交种如果全是雄蚕，那 么既不增加成本，又不需要多费劳力就可增加10%-15% 的蚕丝。 近年来，运用辐射诱变和染色体工程手段先后培育 出有性别标记的限性蚕品种。目前生产上可利用的有卵 色限性系、斑纹限性系和茧色限性系。 卵色限性系： ? 家蚕有28对染色体，性染色体组型为ZW型， 雌蚕（ZW），雄蚕（ZZ）。 ? 用辐射诱发两个第10染色体向w染色体易位的品系。 ? 其中一个在易位的第10号染色体片段上含有白卵基因ω3 ?另一个含有白卵基因ω2 ?+ω2和+ω3 有互补作用，只有同时存在是才表现黑卵 ? ω2和 ω3 均为隐性基因，只要其中一个成为纯合体时便表现为白卵。 ?这种易位雌蚕同持有ω2/ ω2和 ω3/ ω3 的雄蚕交配，分别得到黑雌卵和白雄卵。 采用这样的品系繁殖时，可由光电选卵机多选雄卵孵化，提高产率，降低成本。 四、人工染色体 人工染色体(artificial chromosome) 指人工构建的含有天然染色体基本功能单位的载体系统。人工染色体研究的兴起是染色体工程的一个里程碑。