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三、快速免疫层析技术的应用介绍 能用来做什么 传染病抗原或抗体测定 肿瘤标志物测定 激素测定 农药残留测定 抗生素测定 毒素测定 药物滥用（毒品）测定 三、快速免疫层析技术的应用介绍 针对检验、我们能做什么 传染病抗原或抗体测定 肿瘤标志物测定？？？？ 激素测定 农药残留测定 抗生素测定 毒素测定 药物滥用（毒品）测定 立足需求，充分考虑和整合各种优势资源！ 三、快速免疫层析技术的应用介绍 我们要怎么去做 调研：我们要做采用什么平台技术 平台建设：我们建立快速免疫层析技术平台 项目：我们要做什么项目？ 准备：我们拥有了哪些资源，我们还缺少什么资源？ 三、快速免疫层析技术的应用介绍 免疫层析技术平台 硬件：实验室；设备；生产车间？ 软件：SOP? 人员：专业培训、团队建设 三、快速免疫层析技术的应用介绍 如何去开发一个胶体金层析产品 ——以尿妊娠试纸（HCG)为例 三、快速免疫层析技术的应用介绍 尿妊娠试纸（HCG)的反应原理图 双抗体夹心法 三、快速免疫层析技术的应用介绍 尿妊娠试纸（HCG)的产品研发准备 1、生物材料的准备： 配对的单克隆抗体（特异性针对HCG-α,β亚基) 二抗 2、主要生产材料 硝酸纤维素膜（特定孔径、流速） 样品垫 结合垫 吸收垫（吸水纸）、片材（PVC衬板）等 三、快速免疫层析技术的应用介绍 尿妊娠试纸（HCG)的研发准备 3、主要设备 点膜仪 喷金仪 干燥设备 粘帖装置 切刀 三、快速免疫层析技术的应用介绍 尿妊娠试纸（HCG)部分材料的工艺和质量控制 1、特异性的单克隆抗体 亲和力 特异性 稳定性 三、快速免疫层析技术的应用介绍 尿妊娠试纸（HCG)部分材料的工艺和质量控制 2、标记物与蛋白偶联 颗粒大小 颗粒的均一性 颗粒的形状 标记物与蛋白的最佳比例 标记影响 影响因素考虑 三、快速免疫层析技术的应用介绍 尿妊娠试纸（HCG)部分材料的工艺和质量控制 蛋白与胶体金的偶联： 最佳pH测定：取若干1.5ml的试管，分别加入1ml胶体金 用K2CO3将pH分别调为3，4，5，6，7，8，9，10；加入过量待标记蛋白； 取96孔培养板，按pH从高到低分别将上述胶体金分别取100μl加入孔中，重复三次； 每孔分别加入20μl浓度为10%的NaCl溶液，混合，室温下放置10min； 观察胶体金颜色变化，记录保持红色的最低pH 三、快速免疫层析技术的应用介绍 尿妊娠试纸（HCG)部分材料的工艺和质量控制 蛋白与标记物的偶联： 最佳偶联比例确定：以目测法确定胶体金与待标记蛋白质用量比例，将标记的蛋白质逐级稀释后（由5μg～45μg另设对照管），各取等体积顺序加入一系列装有1ml胶体金的试管中，5min后，在上述各管内分别加入0.1ml 10%氯化钠。 三、快速免疫层析技术的应用介绍 尿妊娠试纸（HCG)部分材料的工艺和质量控制 3、样品垫 玻璃纤维、聚酯膜、纤维素滤纸、无纺布等多种材质，多种规格，批间稳定。 样品垫的作用： 减缓样品渗透速度，有利于样品在结合垫上均匀分布； 去除样品中杂质颗粒； 调节样品等。 样本垫可使用化学物质进行浸渍处理，从而减少样本差异，提高试验的灵敏度。通常可以将洗涤剂、粘性增强剂、阻滞剂及盐渗入样本垫然后加以干燥，该工艺可避免使用复杂辨识剂/追迹缓冲液的麻烦，使检测一步完成。 三、快速免疫层析技术的应用介绍 尿妊娠试纸（HCG)部分材料的工艺和质量控制 4、结合垫 玻璃纤维、聚酯膜、纤维素滤纸、无纺布等多种材质，多种规格，批间稳定。 结合垫的作用主要为： 　 -　吸附一定量的标结合物颗粒； 　　-　吸附并持续不断的将样品转移到NC膜上； 　　-　保持标结合物颗粒的稳定性； 　　-　保证标结合物颗粒定量完全释放等。 三、快速免疫层析技术的应用介绍 尿妊娠试纸（HCG)部分材料的工艺和质量控制 5、硝酸纤维素膜( Nitrocellulose)： 推荐使用Millipore，SS等国外公司的硝酸纤维素膜。 NC膜的作用： - 在检测线和对照线条带区域固定抗体； -　样品在NC膜上流动并与试剂混合发生免疫反应； 　　-　反应在NC膜上显色，读检测结果 NC膜的重要参数： 孔径、对称性、层析速度、蛋白结合力、强度、表面质量、厚度、批间均一性等。 三、快速免疫层析技术的应用介绍 尿妊娠试纸（HCG)部分材料的工艺和质量控制 5、硝酸纤维膜 硝酸纤维膜的分类标准(μm和s) μm: 指的是膜孔径，此说法实际上是沿用了一直以来的 一个形象称呼。 s: 以秒为单位的定义为，每